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sunlifang

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化蛋白混一起分析两个蛋白形成的二聚体活性,可行吗 已有1人参与

如题,我想想看下两个蛋白之间会不会以二聚体的形式表现活性,可以直接将纯化后的蛋白混一起后分析活性吗?若这样可以混合比例有要求吗?如若能提供相关文献更好,谢谢
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-07 15:24:23
sunlifang: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-07 15:49:09
尽量以1:1的比例混合,盐浓度要低一些,50-150 mM NaCl, 然后过分子筛,如果形成混合物,那么就和单体分开了,然后再做下面的实验。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-07-07 15:11:51
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sunlifang

木虫 (正式写手)

内容已删除
3楼2014-07-07 15:51:10
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sunlifang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 15:11:51
尽量以1:1的比例混合,盐浓度要低一些,50-150 mM NaCl, 然后过分子筛,如果形成混合物,那么就和单体分开了,然后再做下面的实验。

我做的构建带的HIS标签,蛋白纯化最后用的是加500mM的PBS buffer洗脱的,你的意思是混合时加入50-150 mM NaCl溶液还是?盐溶液怎么用?谢谢
4楼2014-07-07 16:05:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

两个蛋白都可以透析至盐浓度等价于100mM, 然后按摩尔比1:1混合,浓缩后过分子筛,如果形成复合物,则复合物先洗出,然后是单体。
行至水穷处,坐看云起时
5楼2014-07-07 16:26:04
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sunlifang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 16:26:04
两个蛋白都可以透析至盐浓度等价于100mM, 然后按摩尔比1:1混合,浓缩后过分子筛,如果形成复合物,则复合物先洗出,然后是单体。

纯化完再透析?透析的时间是不是也挺长的,我怕我的蛋白活性会受影响,若我直接按1:1混合然后接着作反应可以吗?
6楼2014-07-07 16:41:18
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

那你怎么知道形成了复合物?
行至水穷处,坐看云起时
7楼2014-07-07 18:04:45
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sunlifang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 18:04:45
那你怎么知道形成了复合物?

我这两个蛋白没表现出预期的活性(蛋白本身有活性),就是想看看二聚体会不会有预期的活性,如果没有就没有必要再看是否形成复合物了。。。谢谢你哈
8楼2014-07-07 18:25:01
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sunlifang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 18:04:45
那你怎么知道形成了复合物?

你好我再问下,二者混合后还需要放置一段时间吗?冰上?
9楼2014-07-07 19:13:15
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by sunlifang at 2014-07-07 19:13:15
你好我再问下,二者混合后还需要放置一段时间吗?冰上?...

冰上应该是OK的,低温操作永远是对的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

行至水穷处,坐看云起时
10楼2014-07-07 20:11:56
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