24小时热门版块排行榜    

查看: 14793  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

[求助] 做QPCR实验时没有CT值(信号)出现,有哪些可能的原因?

这是从Trans 实验室常见问题和解答中找到的,总觉得还有其他的什么原因?
引用回帖:
可能原因: (1)反应循环数不够
对策:35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45cycles),但高于45个循环会增加过多的背景信号。
(2)测荧光信号的步骤有误
对策:一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
(3)引物或探针降解
对策:可通过PAGE电泳检测其完整性。
(4)引物或探针的设计 如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
对策:重新设计引物或探针
(5)模板量不足
对策:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
(6)模板降解
对策:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

没多少金币  就拿5个意思一下   希望能再帮想想好还有哪些可能的原因会造成这种现象。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lrfmog

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
程序有误,没有设定"READ"
9楼2014-07-04 21:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-04 14:06:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-04 22:32:20
做的是染料法的还是探针法的QPCR?可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带,染料法的如果有目的条带的话,肯定是Mix的问题,如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

rainwater
8楼2014-07-04 16:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-04 16:35:12
做的是染料法的还是探针法的QPCR?可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带,染料法的如果有目的条带的话,肯定是Mix的问题,如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。

探针法的    非常感谢你   通过Transgen的微客服咨询了他们的技术,已经得到解决了
10楼2014-07-08 16:27:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +3 llllkkkhh 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:22 by houyaoxu
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
信息提示
请填处理意见