24小时热门版块排行榜    

查看: 15351  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

[求助] 做QPCR实验时没有CT值(信号)出现,有哪些可能的原因?

这是从Trans 实验室常见问题和解答中找到的,总觉得还有其他的什么原因?
引用回帖:
可能原因: (1)反应循环数不够
对策:35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45cycles),但高于45个循环会增加过多的背景信号。
(2)测荧光信号的步骤有误
对策:一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
(3)引物或探针降解
对策:可通过PAGE电泳检测其完整性。
(4)引物或探针的设计 如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
对策:重新设计引物或探针
(5)模板量不足
对策:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
(6)模板降解
对策:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

没多少金币  就拿5个意思一下   希望能再帮想想好还有哪些可能的原因会造成这种现象。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-04 16:35:12
做的是染料法的还是探针法的QPCR?可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带,染料法的如果有目的条带的话,肯定是Mix的问题,如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。

探针法的    非常感谢你   通过Transgen的微客服咨询了他们的技术,已经得到解决了
10楼2014-07-08 16:27:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-04 14:06:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-04 22:32:20
做的是染料法的还是探针法的QPCR?可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带,染料法的如果有目的条带的话,肯定是Mix的问题,如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

rainwater
8楼2014-07-04 16:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lrfmog

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
程序有误,没有设定"READ"
9楼2014-07-04 21:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 8/400 2026-08-17 17:26 by angus9576
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +34 医学老男孩 2026-08-13 81/4050 2026-08-17 16:20 by yudaoqian88
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见