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蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

[求助] 做QPCR实验时没有CT值(信号)出现,有哪些可能的原因?

这是从Trans 实验室常见问题和解答中找到的,总觉得还有其他的什么原因?
引用回帖:
可能原因: (1)反应循环数不够
对策:35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45cycles),但高于45个循环会增加过多的背景信号。
(2)测荧光信号的步骤有误
对策:一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
(3)引物或探针降解
对策:可通过PAGE电泳检测其完整性。
(4)引物或探针的设计 如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
对策:重新设计引物或探针
(5)模板量不足
对策:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
(6)模板降解
对策:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

没多少金币  就拿5个意思一下   希望能再帮想想好还有哪些可能的原因会造成这种现象。
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蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-04 16:35:12
做的是染料法的还是探针法的QPCR?可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带,染料法的如果有目的条带的话,肯定是Mix的问题,如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。

探针法的    非常感谢你   通过Transgen的微客服咨询了他们的技术,已经得到解决了
10楼2014-07-08 16:27:43
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查看全部 12 个回答

蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-04 14:06:43
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-04 22:32:20
做的是染料法的还是探针法的QPCR?可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带,染料法的如果有目的条带的话,肯定是Mix的问题,如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

rainwater
8楼2014-07-04 16:35:12
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lrfmog

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
程序有误,没有设定"READ"
9楼2014-07-04 21:52:05
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