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三爷111金虫 (小有名气)
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关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。 已有2人参与
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最近在用骨髓细胞诱导巨噬细胞，冲出骨髓-过筛网-裂红之后将细胞放在大培养皿里让其贴壁2h后，取上清放到新的培养皿里加1640完全培养基和50ng/ml的M-CSF培养6天，中间半量换液两次。但养出来的细胞在20倍镜下观察胞内有空泡，不知道是怎么会事，是细胞本身就是这样还是细胞因子的用量太大呢？求高人指教啊！ R3CKDF[`}]OK{Z{@QG3[0T2.jpg |
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 巨噬细胞实验 |
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我一直在养BMDM 图中的细胞一看就是培养的时间太久了，cell confluence 太低，这样已经不好用了。 我们用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640（5% Pen/Step, 10% FBS)里培养。 第一天算Day0，Day3天添加培养基100ng/mL M-CSF（不换RPMI） 第五天confluence在80%-90% 就可以使用了。 跑过FACS 这时候97%的贴壁细胞都是F4/80+CD11b+ 第三天的时候是80%左右。 到第七天有99%以上的细胞都是F4/80+CD11b+,但是这时候细胞数量已经下降的很厉害了。 |
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三爷11116楼2016-03-22 01:28:42
【答案】应助回帖
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三爷111: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-09-16 09:41:50
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我们实验室诱导BMDM是这样诱导的： 1、引颈处死小鼠，将小鼠后肢的皮毛剥置足部，连同褪下的皮毛剪去足部，剪下后腿，放入盛有无菌PBS的培养皿中 2、镊子夹住腿骨一端后，用剪刀剔除肌肉，在关节处剪断腿骨 3、 用2mL注射器吸取无血清的1640培养基，将针头刺入骨髓腔，反复冲洗骨髓至骨髓变白，将骨髓冲洗液加入到50mL离心管中，1000rpm离心5min 4、将离心得到的骨髓细胞用10mL含MCSF（50ng/mL）和血清的1640培养基重悬，然后分装到两个25cm2的细胞培养瓶中，置于37℃和5%CO2气体浓度适度的培养箱中培养3天 5、弃上清，换5mL含MCSF（50ng/mL）和血清的1640培养基继续培养4天 |
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6楼2014-09-15 16:40:01
8楼2014-09-22 12:37:30
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pudding9696
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5楼2014-07-04 14:29:39
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