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三爷111

金虫 (小有名气)

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专业: 自身免疫性疾病

[求助] 关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。已有2人参与

最近在用骨髓细胞诱导巨噬细胞，冲出骨髓-过筛网-裂红之后将细胞放在大培养皿里让其贴壁2h后，取上清放到新的培养皿里加1640完全培养基和50ng/ml的M-CSF培养6天，中间半量换液两次。但养出来的细胞在20倍镜下观察胞内有空泡，不知道是怎么会事，是细胞本身就是这样还是细胞因子的用量太大呢？求高人指教啊！

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1楼 2014-07-01 11:48:12

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三爷111

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送红花一朵

引用回帖:

16楼: Originally posted by ChangeJ at 2016-03-22 01:28:42
我一直在养BMDM
图中的细胞一看就是培养的时间太久了，cell confluence 太低，这样已经不好用了。
我们用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640（5% Pen/Step, 10% FBS)里培养。
第一天算Day0，Day3天添加培养基100ng/mL ...

谢谢，想问下您是在培养皿还是培养瓶里诱导的啊？取下来的BM细胞以多少细胞每毫升来培养的？培养结束后要使用的话，是用胰酶消化的吗？我之前也养到过4天就用，4天的时候细胞状态还不错，但是用胰酶消化下来的细胞再铺板培养的话，细胞状态又不好了。期待您的回复，谢谢！