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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。
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三爷111

金虫 (小有名气)

[求助] 关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。 已有2人参与

最近在用骨髓细胞诱导巨噬细胞，冲出骨髓-过筛网-裂红之后将细胞放在大培养皿里让其贴壁2h后，取上清放到新的培养皿里加1640完全培养基和50ng/ml的M-CSF培养6天，中间半量换液两次。但养出来的细胞在20倍镜下观察胞内有空泡，不知道是怎么会事，是细胞本身就是这样还是细胞因子的用量太大呢？求高人指教啊！

关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。
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巨噬细胞实验

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1楼 2014-07-01 11:48:12
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三爷111

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yipan at 2014-07-01 13:21:01
细胞老了。营养过剩。个人观点。

那你培养过这种细胞吗？这是要用细胞因子从祖细胞诱导分化过来的，必须要诱导到6-7天的样子。你有什么改进的建议吗？
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3楼2014-07-01 15:12:46
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三爷111

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青云瀚海 at 2014-09-15 16:40:01
我们实验室诱导BMDM是这样诱导的：
1、引颈处死小鼠，将小鼠后肢的皮毛剥置足部，连同褪下的皮毛剪去足部，剪下后腿，放入盛有无菌PBS的培养皿中
2、镊子夹住腿骨一端后，用剪刀剔除肌肉，在关节处剪断腿骨
3、  ...

非常感谢您的回答，我还想再问一下，你们实验室取下来的骨髓细胞不用贴壁2h-4h之后弃掉贴壁的细胞，收集上清里的细胞这一步吗？是一只老鼠的两条腿的骨髓细胞分成两个培养瓶培养，还是一条腿的骨髓细胞分成两个瓶培养？另外，你们养出来的BMDM细胞状态好吗？阳性率有多少？非常期待您的答复，谢谢啦。
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7楼2014-09-16 09:41:39
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三爷111

金虫 (小有名气)
内容已删除
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9楼2014-09-23 08:59:58
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三爷111

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 落雪无痕725 at 2015-02-03 11:23:27
你好，小弟最近也想做BMM诱导实验，首先感谢你的protocol，有个问题想咨询一下，就是你们把分离出来的骨髓细胞在培养皿中诱导成功后，再如何分离出来，好像单核巨噬细胞贴壁很牢，不容易消化下来，如果诱导好了之后 ...

我们是用胰酶消化的，胰酶消化一两分钟之后，再加含有血清的培养基终止消化就可以了。
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11楼2015-02-03 19:19:02
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三爷111

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 落雪无痕725 at 2015-02-03 11:23:27
你好，小弟最近也想做BMM诱导实验，首先感谢你的protocol，有个问题想咨询一下，就是你们把分离出来的骨髓细胞在培养皿中诱导成功后，再如何分离出来，好像单核巨噬细胞贴壁很牢，不容易消化下来，如果诱导好了之后 ...

就用胰酶消化个一两分钟就可以了
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13楼2015-04-02 09:45:47
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三爷111

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cordeliawrx at 2015-12-08 17:53:44
楼主你好，现在你还养BMDM吗？我刚开始养，实验室之前也没人养过，完全自己摸索，养出的细胞也是这个样子。这是正常的吗？状态好的BMDM应该是什么样子的啊？可以分享一张图看吗？非常感谢！

最近没有再养了，你可以自己摸索着看一下，我觉得细胞养到第四天是状态最好的。你可以取养到第四天的细胞消化下来，测个流式看看F4/80的表达。
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15楼2015-12-09 10:27:28
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三爷111

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by ChangeJ at 2016-03-22 01:28:42
我一直在养BMDM
图中的细胞一看就是培养的时间太久了，cell confluence 太低，这样已经不好用了。
我们用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640（5% Pen/Step, 10% FBS)里培养。
第一天算Day0，Day3天添加培养基100ng/mL ...

谢谢，想问下您是在培养皿还是培养瓶里诱导的啊？取下来的BM细胞以多少细胞每毫升来培养的？培养结束后要使用的话，是用胰酶消化的吗？我之前也养到过4天就用，4天的时候细胞状态还不错，但是用胰酶消化下来的细胞再铺板培养的话，细胞状态又不好了。期待您的回复，谢谢！
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17楼2016-03-22 15:12:27
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