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三爷111

金虫 (小有名气)

[求助] 关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。 已有2人参与

最近在用骨髓细胞诱导巨噬细胞,冲出骨髓-过筛网-裂红之后将细胞放在大培养皿里让其贴壁2h后,取上清放到新的培养皿里加1640完全培养基和50ng/ml的M-CSF培养6天,中间半量换液两次。但养出来的细胞在20倍镜下观察胞内有空泡,不知道是怎么会事,是细胞本身就是这样还是细胞因子的用量太大呢?求高人指教啊!

关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。
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铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by cordeliawrx at 2015-12-08 17:53:44
楼主你好,现在你还养BMDM吗?我刚开始养,实验室之前也没人养过,完全自己摸索,养出的细胞也是这个样子。这是正常的吗?状态好的BMDM应该是什么样子的啊?可以分享一张图看吗?非常感谢!

我一直在养BMDM
图中的细胞一看就是培养的时间太久了,cell confluence 太低,这样已经不好用了。
我们用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640(5% Pen/Step, 10% FBS)里培养。
第一天算Day0,Day3天添加培养基100ng/mL M-CSF(不换RPMI)
第五天confluence在80%-90% 就可以使用了。
跑过FACS 这时候97%的贴壁细胞都是F4/80+CD11b+
第三天的时候是80%左右。
到第七天有99%以上的细胞都是F4/80+CD11b+,但是这时候细胞数量已经下降的很厉害了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

16楼2016-03-22 01:28:42
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yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细胞老了。营养过剩。个人观点。
2楼2014-07-01 13:21:01
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三爷111

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yipan at 2014-07-01 13:21:01
细胞老了。营养过剩。个人观点。

那你培养过这种细胞吗?这是要用细胞因子从祖细胞诱导分化过来的,必须要诱导到6-7天的样子。你有什么改进的建议吗?
3楼2014-07-01 15:12:46
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yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖


三爷111: 金币+1, 基本没有帮助 2014-07-01 21:15:36
这个改进我还真讲不出,按步骤做就挺好。
4楼2014-07-01 16:19:04
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