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三爷111金虫 (小有名气)
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[求助]
关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。 已有2人参与
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最近在用骨髓细胞诱导巨噬细胞，冲出骨髓-过筛网-裂红之后将细胞放在大培养皿里让其贴壁2h后，取上清放到新的培养皿里加1640完全培养基和50ng/ml的M-CSF培养6天，中间半量换液两次。但养出来的细胞在20倍镜下观察胞内有空泡，不知道是怎么会事，是细胞本身就是这样还是细胞因子的用量太大呢？求高人指教啊！ R3CKDF[`}]OK{Z{@QG3[0T2.jpg |
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 巨噬细胞实验 |
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我一直在养BMDM 图中的细胞一看就是培养的时间太久了，cell confluence 太低，这样已经不好用了。 我们用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640（5% Pen/Step, 10% FBS)里培养。 第一天算Day0，Day3天添加培养基100ng/mL M-CSF（不换RPMI） 第五天confluence在80%-90% 就可以使用了。 跑过FACS 这时候97%的贴壁细胞都是F4/80+CD11b+ 第三天的时候是80%左右。 到第七天有99%以上的细胞都是F4/80+CD11b+,但是这时候细胞数量已经下降的很厉害了。 |
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三爷11116楼2016-03-22 01:28:42