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三爷111

金虫 (小有名气)

[求助] 关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。 已有2人参与

最近在用骨髓细胞诱导巨噬细胞,冲出骨髓-过筛网-裂红之后将细胞放在大培养皿里让其贴壁2h后,取上清放到新的培养皿里加1640完全培养基和50ng/ml的M-CSF培养6天,中间半量换液两次。但养出来的细胞在20倍镜下观察胞内有空泡,不知道是怎么会事,是细胞本身就是这样还是细胞因子的用量太大呢?求高人指教啊!

关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。
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巨噬细胞实验

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三爷111

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青云瀚海 at 2014-09-15 16:40:01
我们实验室诱导BMDM是这样诱导的:
1、引颈处死小鼠,将小鼠后肢的皮毛剥置足部,连同褪下的皮毛剪去足部,剪下后腿,放入盛有无菌PBS的培养皿中
2、镊子夹住腿骨一端后,用剪刀剔除肌肉,在关节处剪断腿骨
3、  ...

非常感谢您的回答,我还想再问一下,你们实验室取下来的骨髓细胞不用贴壁2h-4h之后弃掉贴壁的细胞,收集上清里的细胞这一步吗?是一只老鼠的两条腿的骨髓细胞分成两个培养瓶培养,还是一条腿的骨髓细胞分成两个瓶培养?另外,你们养出来的BMDM细胞状态好吗?阳性率有多少?非常期待您的答复,谢谢啦。
7楼2014-09-16 09:41:39
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yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细胞老了。营养过剩。个人观点。
2楼2014-07-01 13:21:01
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三爷111

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yipan at 2014-07-01 13:21:01
细胞老了。营养过剩。个人观点。

那你培养过这种细胞吗?这是要用细胞因子从祖细胞诱导分化过来的,必须要诱导到6-7天的样子。你有什么改进的建议吗?
3楼2014-07-01 15:12:46
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yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖


三爷111: 金币+1, 基本没有帮助 2014-07-01 21:15:36
这个改进我还真讲不出,按步骤做就挺好。
4楼2014-07-01 16:19:04
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