24小时热门版块排行榜    

查看: 18942  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

三爷111

金虫 (小有名气)

[求助] 关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。 已有2人参与

最近在用骨髓细胞诱导巨噬细胞,冲出骨髓-过筛网-裂红之后将细胞放在大培养皿里让其贴壁2h后,取上清放到新的培养皿里加1640完全培养基和50ng/ml的M-CSF培养6天,中间半量换液两次。但养出来的细胞在20倍镜下观察胞内有空泡,不知道是怎么会事,是细胞本身就是这样还是细胞因子的用量太大呢?求高人指教啊!

关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。
R3CKDF[`}]OK{Z{@QG3[0T2.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

巨噬细胞实验

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青云瀚海

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
三爷111: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-09-16 09:41:50
我们实验室诱导BMDM是这样诱导的:
1、引颈处死小鼠,将小鼠后肢的皮毛剥置足部,连同褪下的皮毛剪去足部,剪下后腿,放入盛有无菌PBS的培养皿中
2、镊子夹住腿骨一端后,用剪刀剔除肌肉,在关节处剪断腿骨
3、 用2mL注射器吸取无血清的1640培养基,将针头刺入骨髓腔,反复冲洗骨髓至骨髓变白,将骨髓冲洗液加入到50mL离心管中,1000rpm离心5min
4、将离心得到的骨髓细胞用10mL含MCSF(50ng/mL)和血清的1640培养基重悬,然后分装到两个25cm2的细胞培养瓶中,置于37℃和5%CO2气体浓度适度的培养箱中培养3天
5、弃上清,换5mL含MCSF(50ng/mL)和血清的1640培养基继续培养4天

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

其实这个问题是可以解决的!
6楼2014-09-15 16:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细胞老了。营养过剩。个人观点。
2楼2014-07-01 13:21:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三爷111

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yipan at 2014-07-01 13:21:01
细胞老了。营养过剩。个人观点。

那你培养过这种细胞吗?这是要用细胞因子从祖细胞诱导分化过来的,必须要诱导到6-7天的样子。你有什么改进的建议吗?
3楼2014-07-01 15:12:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖


三爷111: 金币+1, 基本没有帮助 2014-07-01 21:15:36
这个改进我还真讲不出,按步骤做就挺好。
4楼2014-07-01 16:19:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见