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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 关于BMDM-骨髓来源的巨噬细胞的培养。
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三爷111

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 落雪无痕725 at 2015-02-03 11:23:27
你好，小弟最近也想做BMM诱导实验，首先感谢你的protocol，有个问题想咨询一下，就是你们把分离出来的骨髓细胞在培养皿中诱导成功后，再如何分离出来，好像单核巨噬细胞贴壁很牢，不容易消化下来，如果诱导好了之后 ...

我们是用胰酶消化的，胰酶消化一两分钟之后，再加含有血清的培养基终止消化就可以了。
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11楼2015-02-03 19:19:02
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庸医的手术刀

新虫 (初入文坛)
不知道楼主的问题解决没有   我的细胞培养结果和您的一样  希望能分享经验
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12楼2015-03-29 10:59:20
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三爷111

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 落雪无痕725 at 2015-02-03 11:23:27
你好，小弟最近也想做BMM诱导实验，首先感谢你的protocol，有个问题想咨询一下，就是你们把分离出来的骨髓细胞在培养皿中诱导成功后，再如何分离出来，好像单核巨噬细胞贴壁很牢，不容易消化下来，如果诱导好了之后 ...

就用胰酶消化个一两分钟就可以了
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13楼2015-04-02 09:45:47
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cordeliawrx

木虫 (小有名气)
楼主你好，现在你还养BMDM吗？我刚开始养，实验室之前也没人养过，完全自己摸索，养出的细胞也是这个样子。这是正常的吗？状态好的BMDM应该是什么样子的啊？可以分享一张图看吗？非常感谢！
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14楼2015-12-08 17:53:44
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三爷111

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cordeliawrx at 2015-12-08 17:53:44
楼主你好，现在你还养BMDM吗？我刚开始养，实验室之前也没人养过，完全自己摸索，养出的细胞也是这个样子。这是正常的吗？状态好的BMDM应该是什么样子的啊？可以分享一张图看吗？非常感谢！

最近没有再养了，你可以自己摸索着看一下，我觉得细胞养到第四天是状态最好的。你可以取养到第四天的细胞消化下来，测个流式看看F4/80的表达。
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15楼2015-12-09 10:27:28
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ChangeJ

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cordeliawrx at 2015-12-08 17:53:44
楼主你好，现在你还养BMDM吗？我刚开始养，实验室之前也没人养过，完全自己摸索，养出的细胞也是这个样子。这是正常的吗？状态好的BMDM应该是什么样子的啊？可以分享一张图看吗？非常感谢！

我一直在养BMDM
图中的细胞一看就是培养的时间太久了，cell confluence 太低，这样已经不好用了。
我们用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640（5% Pen/Step, 10% FBS)里培养。
第一天算Day0，Day3天添加培养基100ng/mL M-CSF（不换RPMI）
第五天confluence在80%-90% 就可以使用了。
跑过FACS 这时候97%的贴壁细胞都是F4/80+CD11b+
第三天的时候是80%左右。
到第七天有99%以上的细胞都是F4/80+CD11b+,但是这时候细胞数量已经下降的很厉害了。
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三爷111
16楼2016-03-22 01:28:42
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三爷111

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by ChangeJ at 2016-03-22 01:28:42
我一直在养BMDM
图中的细胞一看就是培养的时间太久了，cell confluence 太低，这样已经不好用了。
我们用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640（5% Pen/Step, 10% FBS)里培养。
第一天算Day0，Day3天添加培养基100ng/mL ...

谢谢，想问下您是在培养皿还是培养瓶里诱导的啊？取下来的BM细胞以多少细胞每毫升来培养的？培养结束后要使用的话，是用胰酶消化的吗？我之前也养到过4天就用，4天的时候细胞状态还不错，但是用胰酶消化下来的细胞再铺板培养的话，细胞状态又不好了。期待您的回复，谢谢！
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17楼2016-03-22 15:12:27
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zhangshiqiu8

新虫 (小有名气)
马克
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秋爷，风一样的男人！
18楼2018-09-27 10:50:09
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好研究

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青云瀚海 at 2014-09-15 16:40:01
我们实验室诱导BMDM是这样诱导的：
1、引颈处死小鼠，将小鼠后肢的皮毛剥置足部，连同褪下的皮毛剪去足部，剪下后腿，放入盛有无菌PBS的培养皿中
2、镊子夹住腿骨一端后，用剪刀剔除肌肉，在关节处剪断腿骨
3、  ...

请问您遇到过细胞贴壁后，培养了几天就基本上死掉的情况吗？求回复，跪求
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19楼2019-02-25 17:30:25
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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20楼2019-02-28 15:42:14
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