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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量溶解曲线都很好，但是用来跑凝胶电泳就全部是涂抹状
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huximu

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[求助] 荧光定量溶解曲线都很好，但是用来跑凝胶电泳就全部是涂抹状 已有1人参与

荧光定量溶解曲线都很好，但是用来跑凝胶电泳就全部是涂抹状。换成普通pcr还是涂抹状，GAPDH都是。求解答~引物模板都已经全部换过了。


荧光定量体系是MIX  10ul，cDNA  1ul   depc水8ul  上下引物各0.5ul    总20ul。


普通PCR taq酶 2.5u  0.4ul
            dNTP    2.5mM   2ul
             buffer  （含镁离子）2.5ul
            上下引物各0.5
            25ul体系
荧光定量溶解曲线都很好，但是用来跑凝胶电泳就全部是涂抹状
IMG_20140622_193440 (1).jpg
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1楼 2014-06-25 18:41:24
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★ ★
huximu(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-21 08:28:18
是逆转录没成功刚把，我之前也跑出来这种图过，后来一查，是自己把RNA当做cDNA来跑了，做普通PCR的图都是涂抹状的话，要么是你胶的问题，要么是你模板的问题！   关注哦  出结果了说一声！
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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
2楼2014-07-20 20:58:35
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