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海豚的预言

金虫 (初入文坛)

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虫号: 1800145
注册: 2012-05-07
专业: 生化分析及生物传感

[求助] 关于Dam甲基化和Dpn1的酶切问题

我们设计了一个发卡型DNA，一端标记荧光基团，加入GO可以猝灭其荧光，加入Dam进行甲基化Dpn1酶切，进而标记有荧光基团的短链脱落，荧光得到恢复。
问题是，我做了好几次，荧光恢复很弱，不知道是哪里出了问题，请求各位大神帮忙指点一下：
DNA 2μM,5μL + SAM 0.8μM,1μL +Dam 0.8U/μL,2μL + Dpn1 8U 共计10μL，在1×Dam的buffer里37℃下反应两小时，加入GO，室温反应15分钟后检测

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1楼 2014-06-25 09:43:27

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只是背影

新虫 (初入文坛)

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性别: GG
专业: 无机非金属类光电信息与功

想请教一下，几个问题：
发夹型DNA的高温退化纯化中你是用的什么buffer呢？
你的Dam buffer是什么成分呢，是购买Dam MTase自带的buffer，还是自己配制的？
就是感觉这几个步骤（发夹结构的纯化、甲基化、剪切）所用的buffer都不一样，不知道楼主是怎么安排或设计的？

2楼2017-05-10 15:50:43

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