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关于Dam甲基化和Dpn1的酶切问题
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我们设计了一个发卡型DNA，一端标记荧光基团，加入GO可以猝灭其荧光，加入Dam进行甲基化Dpn1酶切，进而标记有荧光基团的短链脱落，荧光得到恢复。 问题是，我做了好几次，荧光恢复很弱，不知道是哪里出了问题，请求各位大神帮忙指点一下： DNA 2μM,5μL + SAM 0.8μM,1μL +Dam 0.8U/μL,2μL + Dpn1 8U 共计10μL，在1×Dam的buffer里37℃下反应两小时，加入GO，室温反应15分钟后检测 |
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只是背影
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