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海豚的预言

金虫 (初入文坛)

[求助] 关于Dam甲基化和Dpn1的酶切问题

我们设计了一个发卡型DNA,一端标记荧光基团,加入GO可以猝灭其荧光,加入Dam进行甲基化Dpn1酶切,进而标记有荧光基团的短链脱落,荧光得到恢复。
问题是,我做了好几次,荧光恢复很弱,不知道是哪里出了问题,请求各位大神帮忙指点一下:
DNA 2μM,5μL + SAM 0.8μM,1μL +Dam 0.8U/μL,2μL + Dpn1 8U 共计10μL,在1×Dam的buffer里37℃下反应两小时,加入GO,室温反应15分钟后检测
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只是背影

新虫 (初入文坛)

想请教一下,几个问题:
发夹型DNA的高温退化纯化中你是用的什么buffer呢?
你的Dam buffer是什么成分呢,是购买Dam MTase自带的buffer,还是自己配制的?
就是感觉这几个步骤(发夹结构的纯化、甲基化、剪切)所用的buffer都不一样,不知道楼主是怎么安排或设计的?
2楼2017-05-10 15:50:43
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