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xuexue1992

新虫 (初入文坛)

[交流] 水稻原生质体 已有1人参与

在做亚细胞定位，空载有30%的转化率，但目的载体（7kb）做转化后检测不到，不知道是不表达蛋白，还是转化不成功。会不会是有的质粒本身就很难转？质粒的哪些性质会影响转化呢？如果目的蛋白的表达量很低，即使成功转入并表达，是否也检测不到？（用的GFP）
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1楼 2014-06-20 14:46:52
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主最好做个western确认一下蛋白是否表达。质粒本身对表达水平和转化效率会有一些影响，但我不认为会严重到影响是否表达。表达量很低，当然会检测不到，如果你能确定有表达但看不到荧光，那就一方面要考虑是否某些特定蛋白结构影响GFP信号（譬如试试将GFP连到目的蛋白另外一端），以及换个启动子试试。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2014-06-20 19:25:44
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