| 查看: 2001 | 回复: 5 | ||
| 本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看 | ||
6105银虫 (小有名气)
|
[求助]
关于原生质体单核化
|
|
| 如果菌丝没有锁状联合，且菌丝是多核的，经过原生质体再生，怎样确定其菌丝是不是单核化的的？ |
回复此楼» 猜你喜欢
自荐读博
已经有9人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
-
自然科学基金委宣布启动申请书“瘦身提质”行动
已经有4人回复
-
求个博导看看
已经有18人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达问题
已经有14人回复
- 大家来看看这个烟草原生质体里面的细胞器是什么
已经有11人回复
- 拟南芥 原生质体
已经有4人回复
- 真菌及其原生质体的拍照问题
已经有4人回复
- 原生质体单核化问题 急求！！！！！
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于原生质体融合的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】原生质体培养
已经有15人回复
- 【求助】看内生真菌的原生质体需要多少倍显微镜可见？形态如何。。
已经有4人回复
HarveyWang
捐助贵宾 (知名作家)
海外行者
- MicEPI: 15
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 2277.2
- 散金: 24
- 红花: 65
- 帖子: 6880
- 在线: 946小时
- 虫号: 528557
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+6, MicEPI+1): 鼓励积极应助！ 回答每次都很经典啊！ 2012-02-17 18:30:15
6105: 金币+1 2012-04-26 16:46:27
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+6, MicEPI+1): 鼓励积极应助！ 回答每次都很经典啊！ 2012-02-17 18:30:15
6105: 金币+1 2012-04-26 16:46:27
|
呵呵。。。这正是我几个月前考虑的问题啊。 1. 单核化检验：就是细胞核染色啊。 主要是DAPI和Hoechst 33258，这个有试剂卖的。另外也有用苏木精染色的。 前两种试剂链接：http://www.beyotime.com/c1002.htm http://www.beyotime.com/c1018.htm DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。 Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。 Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。 Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。 Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。 本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。 2.如何获得单核原生质：一般是用孢子消化产生原生质体。 孢子在培养5-8小时后，就开始多核化了。所以，要注意孢子的悬浮时间不能过长。这个有相关的论文发表的。 |
2楼2012-02-17 11:16:41
6105
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1359.4
- 散金: 15
- 帖子: 283
- 在线: 20.9小时
- 虫号: 1622212
- 注册: 2012-02-17
- 性别: MM
- 专业: 食用真菌学
3楼2012-02-17 18:29:34
HarveyWang
捐助贵宾 (知名作家)
海外行者
- MicEPI: 15
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 2277.2
- 散金: 24
- 红花: 65
- 帖子: 6880
- 在线: 946小时
- 虫号: 528557
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-02-18 10:12:41
|
是的。 单核的原生质体，那再生萌发以后，很快变成多核。 但是，我们的遗传操作是针对的单核（设为核遗传标记A）原生质体。 在进行遗传操作后，发生了改变，记为A--》B。 生长过程中，就是多核的（BB）、（BBB）等。 遗传标记B 容易在后代传递下去。 如果我们针对的是多核的原生质体，例如（AAA）。 在进行基因插入时，只能使其中一个核发生相同的变化，例如A--》B。 这时原生质体就成了（AAB）。而这个AAB的原生质体，会产生A B两类遗传标记的菌丝体。 如下图示： A A B （AA）（AAA） （AA）（AAA（AAAA） （AB）（BB）（AAB） 相当于我们需要的遗传特征B被稀释了。相当于出现了【杂核】类型。这就是用多核的原生质体进行基因操作，即使第一代成功了，遗传特征也难以传递下去的原因之一。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
61054楼2012-02-18 07:10:49
6105
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1359.4
- 散金: 15
- 帖子: 283
- 在线: 20.9小时
- 虫号: 1622212
- 注册: 2012-02-17
- 性别: MM
- 专业: 食用真菌学
5楼2012-02-18 13:54:50
6楼2012-02-18 21:06:15