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HarveyWang

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+6, MicEPI+1): 鼓励积极应助！回答每次都很经典啊！ 2012-02-17 18:30:15
6105: 金币+1 2012-04-26 16:46:27

呵呵。。。这正是我几个月前考虑的问题啊。

1. 单核化检验：就是细胞核染色啊。

主要是DAPI和Hoechst 33258，这个有试剂卖的。另外也有用苏木精染色的。
前两种试剂链接：http://www.beyotime.com/c1002.htm
http://www.beyotime.com/c1018.htm

DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。

Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

2.如何获得单核原生质：一般是用孢子消化产生原生质体。
孢子在培养5-8小时后，就开始多核化了。所以，要注意孢子的悬浮时间不能过长。这个有相关的论文发表的。