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6105银虫 (小有名气)
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[求助]
关于原生质体单核化
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| 如果菌丝没有锁状联合，且菌丝是多核的，经过原生质体再生，怎样确定其菌丝是不是单核化的的？ |
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5楼2012-02-18 13:54:50
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【答案】应助回帖
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呵呵。。。这正是我几个月前考虑的问题啊。 1. 单核化检验：就是细胞核染色啊。 主要是DAPI和Hoechst 33258，这个有试剂卖的。另外也有用苏木精染色的。 前两种试剂链接：http://www.beyotime.com/c1002.htm http://www.beyotime.com/c1018.htm DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。 Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。 Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。 Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。 Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。 本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。 2.如何获得单核原生质：一般是用孢子消化产生原生质体。 孢子在培养5-8小时后，就开始多核化了。所以，要注意孢子的悬浮时间不能过长。这个有相关的论文发表的。 |
2楼2012-02-17 11:16:41
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3楼2012-02-17 18:29:34
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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-02-18 10:12:41
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是的。 单核的原生质体，那再生萌发以后，很快变成多核。 但是，我们的遗传操作是针对的单核（设为核遗传标记A）原生质体。 在进行遗传操作后，发生了改变，记为A--》B。 生长过程中，就是多核的（BB）、（BBB）等。 遗传标记B 容易在后代传递下去。 如果我们针对的是多核的原生质体，例如（AAA）。 在进行基因插入时，只能使其中一个核发生相同的变化，例如A--》B。 这时原生质体就成了（AAB）。而这个AAB的原生质体，会产生A B两类遗传标记的菌丝体。 如下图示： A A B （AA）（AAA） （AA）（AAA（AAAA） （AB）（BB）（AAB） 相当于我们需要的遗传特征B被稀释了。相当于出现了【杂核】类型。这就是用多核的原生质体进行基因操作，即使第一代成功了，遗传特征也难以传递下去的原因之一。 |
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4楼2012-02-18 07:10:49
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