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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 双向电泳提取蛋白质的方法
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康熙61

金虫 (小有名气)

[求助] 双向电泳提取蛋白质的方法 已有2人参与

我是最近才开始做双向电泳的，做了几次效果都不理想。分析主要原因是提取蛋白时蛋白损失过多。现在求助大家是否提蛋白较好的方法。
   我主要做的标本是组织还有细胞
  处理细胞的方法：
  1.用PBS洗细胞3次。
2.加入裂解液4℃裂解25min(裂解液 7M尿素，2M硫脲 ，4%DTT，CHAPS 4-5ul)
3.冰上超声破碎10min
4.4℃ 14000rpm 离心10in
5.取部分上清测定蛋白浓度、


组织的提取方法 本人觉得不大好，就不写出来了。
希望大家能多给我提供几种提蛋白的方法，最好是做双向电泳时用的提蛋白的方法。
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1楼 2014-06-16 09:02:48
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康熙61

金虫 (小有名气)
你做双向电泳 做的怎么样？
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2楼2014-06-17 11:54:44
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梁青

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人感觉用液氮研磨效果是最好的。
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Nevergiveup!
3楼2014-10-20 16:21:00
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西药

铜虫 (正式写手)
请问你现在做得怎样了啊？
我还会加核酸酶

但是跑胶完了还是不好
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4楼2015-03-30 11:15:25
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haze12344

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西药 at 2015-03-30 11:15:25
请问你现在做得怎样了啊？
我还会加核酸酶

但是跑胶完了还是不好

我的是用TCA-丙酮沉淀做的~还不错
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生物你好
5楼2015-04-10 17:28:49
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康熙61

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by haze12344 at 2015-04-10 17:28:49
我的是用TCA-丙酮沉淀做的~还不错...

现在已经没有做了
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6楼2015-04-11 19:20:58
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