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我乐意臭美

铜虫 (初入文坛)

[求助] 乳酸乳球菌RNA提取问题 已有1人参与

大家好,我提乳酸乳球菌的RNA。用的试剂盒是天根的,菌体用250ul的20mg/ml的溶菌酶处理15min。可是提完什么也没有
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朱多龙

木虫 (小有名气)

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我乐意臭美(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-13 16:34:04
乳酸乳球菌是阳性菌,细胞壁比较厚。你需要把溶菌酶的浓度提高。还要注意的就是初始细胞数,太多太少都不好,提之前测下OD.
2楼2014-06-13 12:54:54
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我乐意臭美

铜虫 (初入文坛)

菌体太多太少都不好具体有什么影响呢?还有我看有人用5mg/ml的也能提出来乳酸菌的RNA?
3楼2014-06-13 15:13:28
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
我乐意臭美: 金币+2, 有帮助 2014-06-17 10:53:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by 我乐意臭美 at 2014-06-13 15:13:28
菌体太多太少都不好具体有什么影响呢?还有我看有人用5mg/ml的也能提出来乳酸菌的RNA?

菌体太多裂解不充分而且容易堵柱子。菌体太少提的RNA量比较低。用5mg/ml ??你确定吗?我感觉不可能,提乳酸菌RNA时溶壁时间不能太长,而又要到达溶壁的较好效果只能提高溶菌酶浓度。我上个月的时候浓度都达到50mg/ml-100mg/ml了。还有你说提出来什么都没有,显然是没有裂解好,不然不可能连弥散的带都没有。
4楼2014-06-13 22:06:01
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我乐意臭美

铜虫 (初入文坛)

嗯,他们做的嗜热链球菌和乳杆菌,按照试剂盒的溶菌酶浓度为3mg/ml,15min,37℃。你一般是溶菌酶多长时间处理呢?
我发现我的问题了,因为我提的菌是从发酵乳酸的培养基中取得,为了获得较多的乳酸,我的培养基中加入了碳酸钙。所以菌处理时,我加了盐酸去除碳酸钙,所以什么也没提出来,要是普通的M17培养的菌就能提出来,但是我手法不好所以提的不太好。
我也不知道该怎么处理这个碳酸钙的问题?我也尝试了不去除碳酸钙直接提RNA,但是也什么也提不出来。
5楼2014-06-17 10:53:41
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