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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 乳酸乳球菌RNA提取问题
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我乐意臭美

铜虫 (初入文坛)

[求助] 乳酸乳球菌RNA提取问题 已有1人参与

大家好，我提乳酸乳球菌的RNA。用的试剂盒是天根的，菌体用250ul的20mg/ml的溶菌酶处理15min。可是提完什么也没有
希望高人指点
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1楼 2014-06-13 10:25:43
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我乐意臭美(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-13 16:34:04
乳酸乳球菌是阳性菌，细胞壁比较厚。你需要把溶菌酶的浓度提高。还要注意的就是初始细胞数，太多太少都不好，提之前测下OD.
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2楼2014-06-13 12:54:54
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我乐意臭美

铜虫 (初入文坛)
菌体太多太少都不好具体有什么影响呢？还有我看有人用5mg/ml的也能提出来乳酸菌的RNA？
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3楼2014-06-13 15:13:28
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
我乐意臭美: 金币+2, ★有帮助 2014-06-17 10:53:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by 我乐意臭美 at 2014-06-13 15:13:28
菌体太多太少都不好具体有什么影响呢？还有我看有人用5mg/ml的也能提出来乳酸菌的RNA？

菌体太多裂解不充分而且容易堵柱子。菌体太少提的RNA量比较低。用5mg/ml ？？你确定吗？我感觉不可能，提乳酸菌RNA时溶壁时间不能太长，而又要到达溶壁的较好效果只能提高溶菌酶浓度。我上个月的时候浓度都达到50mg/ml-100mg/ml了。还有你说提出来什么都没有，显然是没有裂解好，不然不可能连弥散的带都没有。
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4楼2014-06-13 22:06:01
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我乐意臭美

铜虫 (初入文坛)
嗯，他们做的嗜热链球菌和乳杆菌，按照试剂盒的溶菌酶浓度为3mg/ml，15min，37℃。你一般是溶菌酶多长时间处理呢？
我发现我的问题了，因为我提的菌是从发酵乳酸的培养基中取得，为了获得较多的乳酸，我的培养基中加入了碳酸钙。所以菌处理时，我加了盐酸去除碳酸钙，所以什么也没提出来，要是普通的M17培养的菌就能提出来，但是我手法不好所以提的不太好。
我也不知道该怎么处理这个碳酸钙的问题？我也尝试了不去除碳酸钙直接提RNA，但是也什么也提不出来。
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5楼2014-06-17 10:53:41
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