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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒共转染问题，瞬转。
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 质粒共转染问题，瞬转。 已有1人参与

小弟想做一个家族基因的3个亚族共转染，目前质粒已经构建好了，也单个转染看了下免疫荧光，现在想把3个不同的质粒一起转染到细胞中，瞬转即可（考虑到抗性基因都一样，而且筛稳转太难），想问一下各位大虾，3个质粒共转染的浓度应该怎么确定？是3个质粒的浓度加起来跟说明书上要求的一样么？用的是英俊的LIP2000转染试剂，3个质粒都是装在PCDNA3.1+上，并且都装了CMYC标签蛋白（因为这3个基因市面上都没有可用的抗体，所以装了这个标签）。
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1楼 2014-06-12 09:39:14
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 新生代力量 at 2014-06-12 15:58:18
三个质粒的总量加起来最好不超过1ug，如果要转染的量确实很多，可以分开转啊~不然，很容易造成转染不平衡的~

比如转6孔板，说明书的要求是2.5ug，那我3种质粒的浓度加起来也不能超过1ug吗？其实我不用考虑转染不平衡，只要3中质粒都转进去就可以了。
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3楼2014-06-13 15:16:32
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新生代力量

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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sars37(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 18:53:17
sars37: 金币+9 2014-06-13 15:17:59
三个质粒的总量加起来最好不超过1ug，如果要转染的量确实很多，可以分开转啊~不然，很容易造成转染不平衡的~
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2楼2014-06-12 15:58:18
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 新生代力量 at 2014-06-12 15:58:18
三个质粒的总量加起来最好不超过1ug，如果要转染的量确实很多，可以分开转啊~不然，很容易造成转染不平衡的~

比如说转染6孔板，说明书上要求是2.5ug，那我3种质粒加起来的浓度也不能超过1ug吗？其实我不用考虑转染不平衡，只要3种质粒都转进去就好了。
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4楼2014-06-13 15:17:48
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
3楼: Originally posted by sars37 at 2014-06-13 15:16:32
比如转6孔板，说明书的要求是2.5ug，那我3种质粒的浓度加起来也不能超过1ug吗？其实我不用考虑转染不平衡，只要3中质粒都转进去就可以了。...

问一下楼主这个问题解决了吗？最近我要做泛素化，要转泛素和另一个质粒进去，这两个质粒总量和平时单转一个质粒一样吗？两个质粒剂量各占一半还是按照别的什么分配的呢？多谢！

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5楼2017-06-06 20:45:29
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