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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有没有人做过稳转染啊？
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[求助] 有没有人做过稳转染啊？

筛选稳定细胞系有两种方法：1）转染质粒后，单克隆方法筛选稳定细胞系；2）慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。
做稳定转染是不是就是根据载体上的抗性基因来筛稳定表达的细胞啊？
具体流程有哪些呢？我最近需要做稳转，想跟大家请教一下。
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1楼 2012-12-03 15:18:16
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
肖颖2009: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-06 10:43:15
我最近也一直在做稳定细胞系，一般来说稳转染除了包涵目的基因的转移载体，还需要一些辅助性质粒，帮助这个基因能够稳定转到细胞基因组中的，而筛选阳性克隆的信号是根据转移载体上的抗性基因，我已经做到筛选这一步了，后续就是鉴定的工作了
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2楼2012-12-03 20:20:35
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-03 20:20:35
我最近也一直在做稳定细胞系，一般来说稳转染除了包涵目的基因的转移载体，还需要一些辅助性质粒，帮助这个基因能够稳定转到细胞基因组中的，而筛选阳性克隆的信号是根据转移载体上的抗性基因，我已经做到筛选这一步 ...

请问你是用的什么载体呢？根据你的描述感觉你用的是腺病毒载体啊~
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3楼2012-12-06 10:44:04
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-12-06 10:44:04
请问你是用的什么载体呢？根据你的描述感觉你用的是腺病毒载体啊~...

你是说包装我的目的基因的载体还是？因为现在的包装系统是有四个质粒的呢
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4楼2012-12-06 13:12:45
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-06 13:12:45
你是说包装我的目的基因的载体还是？因为现在的包装系统是有四个质粒的呢...

我做的好像不需要辅助质粒哦，直接在哺乳细胞里表达的那种。
你用的骨架质粒和供体质粒是？
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5楼2012-12-06 14:06:42
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-12-07 08:02:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-12-06 14:06:42
我做的好像不需要辅助质粒哦，直接在哺乳细胞里表达的那种。
你用的骨架质粒和供体质粒是？...

是在哺乳动物表达的啊，我的目的基因用的是PMX的载体，而其他的七个辅助质粒用的是一套成熟的包装基因的系统，是MLV的
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6楼2012-12-06 21:16:51
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
亲，你的稳转实验进行的咋样了，还顺利否？
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7楼2013-04-15 15:49:25
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

亲，使用IOS技术做吧，100%work。。。
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8楼2013-04-15 17:15:41
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by nlbtr at 2013-04-15 17:15:41
亲，使用IOS技术做吧，100%work。。。

IOS技术？你们有成功的经验可以分享么
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9楼2013-05-20 16:27:27
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sarah-miao at 2013-04-15 15:49:25
亲，你的稳转实验进行的咋样了，还顺利否？

目前做瞬转比较多
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10楼2013-06-26 09:46:26
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