应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有没有人做过稳转染啊？
121/2返回列表12下一页
查看: 1966  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[求助] 有没有人做过稳转染啊？

筛选稳定细胞系有两种方法：1）转染质粒后，单克隆方法筛选稳定细胞系；2）慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。
做稳定转染是不是就是根据载体上的抗性基因来筛稳定表达的细胞啊？
具体流程有哪些呢？我最近需要做稳转，想跟大家请教一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-03 15:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
肖颖2009: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-06 10:43:15
我最近也一直在做稳定细胞系，一般来说稳转染除了包涵目的基因的转移载体，还需要一些辅助性质粒，帮助这个基因能够稳定转到细胞基因组中的，而筛选阳性克隆的信号是根据转移载体上的抗性基因，我已经做到筛选这一步了，后续就是鉴定的工作了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2012-12-03 20:20:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-03 20:20:35
我最近也一直在做稳定细胞系，一般来说稳转染除了包涵目的基因的转移载体，还需要一些辅助性质粒，帮助这个基因能够稳定转到细胞基因组中的，而筛选阳性克隆的信号是根据转移载体上的抗性基因，我已经做到筛选这一步 ...

请问你是用的什么载体呢？根据你的描述感觉你用的是腺病毒载体啊~
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-06 10:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-12-06 10:44:04
请问你是用的什么载体呢？根据你的描述感觉你用的是腺病毒载体啊~...

你是说包装我的目的基因的载体还是？因为现在的包装系统是有四个质粒的呢
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-06 13:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-06 13:12:45
你是说包装我的目的基因的载体还是？因为现在的包装系统是有四个质粒的呢...

我做的好像不需要辅助质粒哦，直接在哺乳细胞里表达的那种。
你用的骨架质粒和供体质粒是？
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-06 14:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-12-07 08:02:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-12-06 14:06:42
我做的好像不需要辅助质粒哦，直接在哺乳细胞里表达的那种。
你用的骨架质粒和供体质粒是？...

是在哺乳动物表达的啊，我的目的基因用的是PMX的载体，而其他的七个辅助质粒用的是一套成熟的包装基因的系统，是MLV的
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-06 21:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
亲，你的稳转实验进行的咋样了，还顺利否？
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-15 15:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

亲，使用IOS技术做吧，100%work。。。
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-15 17:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by nlbtr at 2013-04-15 17:15:41
亲，使用IOS技术做吧，100%work。。。

IOS技术？你们有成功的经验可以分享么
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-20 16:27:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sarah-miao at 2013-04-15 15:49:25
亲，你的稳转实验进行的咋样了，还顺利否？

目前做瞬转比较多
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-26 09:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 肖颖2009 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 13:51 by jCd0dEvKHShX
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 13:41 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +14 晴天加油 2026-08-26 15/750 2026-08-29 11:06 by biily
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 10:18 by winsaint
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[职场人生] 学生撞见辅导员送外卖，第二天全班都沉默了 +3 鲸鱼融金_浙江_� 2026-08-22 3/150 2026-08-26 09:01 by zzuzxg
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭