应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有没有人做过稳转染啊？
121/2返回列表12下一页
查看: 1971  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[求助] 有没有人做过稳转染啊？

筛选稳定细胞系有两种方法：1）转染质粒后，单克隆方法筛选稳定细胞系；2）慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。
做稳定转染是不是就是根据载体上的抗性基因来筛稳定表达的细胞啊？
具体流程有哪些呢？我最近需要做稳转，想跟大家请教一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-03 15:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
肖颖2009: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-06 10:43:15
我最近也一直在做稳定细胞系，一般来说稳转染除了包涵目的基因的转移载体，还需要一些辅助性质粒，帮助这个基因能够稳定转到细胞基因组中的，而筛选阳性克隆的信号是根据转移载体上的抗性基因，我已经做到筛选这一步了，后续就是鉴定的工作了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2012-12-03 20:20:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-03 20:20:35
我最近也一直在做稳定细胞系，一般来说稳转染除了包涵目的基因的转移载体，还需要一些辅助性质粒，帮助这个基因能够稳定转到细胞基因组中的，而筛选阳性克隆的信号是根据转移载体上的抗性基因，我已经做到筛选这一步 ...

请问你是用的什么载体呢？根据你的描述感觉你用的是腺病毒载体啊~
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-06 10:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-12-06 10:44:04
请问你是用的什么载体呢？根据你的描述感觉你用的是腺病毒载体啊~...

你是说包装我的目的基因的载体还是？因为现在的包装系统是有四个质粒的呢
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-06 13:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-06 13:12:45
你是说包装我的目的基因的载体还是？因为现在的包装系统是有四个质粒的呢...

我做的好像不需要辅助质粒哦，直接在哺乳细胞里表达的那种。
你用的骨架质粒和供体质粒是？
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-06 14:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-12-07 08:02:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-12-06 14:06:42
我做的好像不需要辅助质粒哦，直接在哺乳细胞里表达的那种。
你用的骨架质粒和供体质粒是？...

是在哺乳动物表达的啊，我的目的基因用的是PMX的载体，而其他的七个辅助质粒用的是一套成熟的包装基因的系统，是MLV的
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-06 21:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
亲，你的稳转实验进行的咋样了，还顺利否？
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-15 15:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

亲，使用IOS技术做吧，100%work。。。
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-15 17:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by nlbtr at 2013-04-15 17:15:41
亲，使用IOS技术做吧，100%work。。。

IOS技术？你们有成功的经验可以分享么
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-20 16:27:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sarah-miao at 2013-04-15 15:49:25
亲，你的稳转实验进行的咋样了，还顺利否？

目前做瞬转比较多
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-26 09:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 肖颖2009 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭