| 查看: 2182 | 回复: 2 | ||||
cofe金虫 (小有名气)
|
[求助]
求植物组织核蛋白提取的方法 已有1人参与
|
|
想用2-D的方法比较植物核蛋白表达的差异，求组织核蛋白提取的方法。 从网上查到一些核蛋白提取的试剂盒，但1）大多适合动物组织或者细胞，不知道有没人用这些试剂盒做过植物组织？2）试剂盒说明提出的核蛋白适合western blot、Co-IP等，不知是否可用于2-D分析？ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
0703化学321分求调剂
已经有4人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有19人回复
-
298求调剂
已经有5人回复
-
346求调剂 一志愿070303有机化学
已经有6人回复
-
288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行
已经有3人回复
-
324求调剂
已经有11人回复
-
307求调剂
已经有13人回复
-
071010 323 分求调剂
已经有3人回复
-
材料调剂
已经有9人回复
-
材料专硕调剂
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酚提取法提取植物蛋白
已经有5人回复
- 植物蛋白饮料杀菌方式
已经有9人回复
- 急求：免疫共沉淀求助！
已经有8人回复
- 请问有没有可以帮忙提取植物蛋白的公司？
已经有5人回复
- 植物组织中蛋白的测定
已经有7人回复
- 酚氯仿法提取DNA的原理
已经有29人回复
- 细胞碎片中蛋白的提取测定方法
已经有7人回复
- 抽提组织中蛋白质的步骤
已经有4人回复
- 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
已经有4人回复
- 在做WB，想知道大概一般提取的蛋白浓度是多少？
已经有4人回复
- 沸水提取植物多糖，分离困难
已经有24人回复
- 求适合western bloting的提取植物组织蛋白提取方法
已经有12人回复
- 【资料】植物总蛋白提取方法
已经有80人回复
- 植物总蛋白提取方法的问题
已经有3人回复
- 植物干叶片的蛋白提取
已经有3人回复
- 有谁使用碧云天的蛋白裂解液提取核蛋白？
已经有3人回复
- 【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题
已经有12人回复
- 【求助】请教植物线粒体的提取
已经有4人回复
- 【求助/交流】核蛋白的提取，有谁知道具体方案？
已经有6人回复
- 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！
已经有10人回复
- 【求助】求助：植物细胞壁的提取具体方法！
已经有5人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
- 【求助/交流】植物蛋白提取方法讨论
已经有14人回复
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
-
专家经验: +140 - 应助: 308 (大学生)
- 金币: 1079.5
- 散金: 8294
- 红花: 65
- 沙发: 5
- 帖子: 1996
- 在线: 266.1小时
- 虫号: 3188421
- 注册: 2014-05-07
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cofe(西门吹雪170代发): 金币+10, 鼓励回帖交流 2014-06-10 20:49:09
感谢参与，应助指数 +1
cofe(西门吹雪170代发): 金币+10, 鼓励回帖交流 2014-06-10 20:49:09
|
植物组织蛋白质提取方法（summer） 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！ 2、 植物组织蛋白质提取方法 (summer) 三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品： 提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮 裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！ 3、 组织：肠黏膜 （newinbio） 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达 应用TRIPURE提取蛋白质步骤： 含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量） 倒转混匀，置室温10min 离心：12000 g，10min，4度，弃上清 加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量） 振荡，置室温20min 离心： 7500g，5 min，4度，弃上清 重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次 沉淀中加入100％乙醇 2ml 充分振荡混匀，置室温20 min 离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀 1％SDS溶解沉淀 离心：10000g，10min，4度 取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT） 存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。 解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。 5、 植物材料：水稻苗，叶鞘，根（ynibcas） 1、200毫克样品置于冰上磨碎 2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清 3、重复离心5min lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40 6、 蛋白质样品制备（sigma） 秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行。 100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，（有必要再用80％丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。 按每mg干粉加入20μl（可调） UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度 （温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70度保存 7、 植物根中蛋白质的抽取（phenol） (1) sample, 液氮研磨 (2) 装1.5 ml centrifuge 用tube (3) 加 1M KH2PO4+K2HPO4 700 ul (4) 12000 rpm, 4度, 10-15minite (5) 取上层液，蛋白质就在里面 不知道能不能帮上你 |
2楼2014-06-10 19:27:04
cofe
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 297.7
- 散金: 69
- 帖子: 189
- 在线: 244.8小时
- 虫号: 321392
- 注册: 2007-03-10
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2014-06-11 11:09:10
