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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB背景又高了，请教高手
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阳阳的猫猫

金虫 (小有名气)

[交流] WB背景又高了，请教高手

这是今天的显影结果，BSA封闭室温1h，一抗anti-nitrotyrosine度过夜，二抗anti-rabbit室温2h。和显影液在膜上时间长了有关吗？

WB背景又高了，请教高手
nitro.png
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1楼 2014-05-29 16:46:10
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阳阳的猫猫

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-05-31 18:50:59
1. 封闭液用5%脱脂奶粉会比BSA好，封闭1小时一般够了。当然如果奶粉中有影响你目的蛋白检测的成分那你还是用BSA，增加封闭时间；2. 二抗反应时间1小时即可，浓度也不要太大。至于你说的显影时间长，你到底显了多长时 ...

非常感谢。我的显影液在膜上大约半分钟吧，然后才开始曝光。
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5楼2014-06-02 09:13:53
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★
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youlinglyw: 金币+2 2014-07-18 12:53:52
封闭时间短了，二抗时间长了
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2楼2014-05-30 11:12:40
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2 2014-07-18 12:54:15
1. 封闭液用5%脱脂奶粉会比BSA好，封闭1小时一般够了。当然如果奶粉中有影响你目的蛋白检测的成分那你还是用BSA，增加封闭时间；2. 二抗反应时间1小时即可，浓度也不要太大。至于你说的显影时间长，你到底显了多长时间？好的显影液一般1 min内就可以了。
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4楼2014-05-31 18:50:59
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 阳阳的猫猫 at 2014-06-02 09:13:53
非常感谢。我的显影液在膜上大约半分钟吧，然后才开始曝光。...

你在膜上显影？不是应该用胶片么。。。
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6楼2014-06-02 10:54:01
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