| 查看: 2550 | 回复: 7 | ||||
阳阳的猫猫金虫 (小有名气)
|
[交流]
WB背景又高了，请教高手
|
这是今天的显影结果，BSA封闭室温1h，一抗anti-nitrotyrosine度过夜，二抗anti-rabbit室温2h。和显影液在膜上时间长了有关吗？ nitro.png |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
280求调剂
已经有3人回复
-
085400 328分 求调剂
已经有7人回复
-
材料专硕322
已经有12人回复
-
一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历
已经有3人回复
-
314求调剂
已经有14人回复
-
调剂 化学 307
已经有11人回复
-
化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文
已经有10人回复
-
材料299专硕求调剂
已经有5人回复
-
083200 初试305分 求调剂
已经有10人回复
-
332，085601求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 脑电数据急需处理，请教高手
已经有5人回复
- 反应产物分子量不对，请教高手
已经有5人回复
- 请教制备介孔TiO2的相关问题
已经有3人回复
- 请问，WB转膜后用考染的原因或者目的是什么？
已经有9人回复
- 请教WB方面的一些小细节问题
已经有4人回复
- 单抗的特异性鉴定做WB，一
已经有3人回复
- 求助关于WB的内参问题
已经有3人回复
- 关于WB转膜的问题
已经有9人回复
- 如果WB做不出结果，该怎么判断是不是抗体的问题？
已经有6人回复
- wb植物内参抗体选择
已经有3人回复
- Western Blot结果 条带中间 不见了，请教高手！
已经有13人回复
- WB曝光后，请教下图片出现此问题的原因
已经有7人回复
- 胶回收老收不到，请教高手
已经有27人回复
- 请高手出招帮忙画三维晶体结构示意图，谢谢啦，用什么软件画？
已经有6人回复
- WB电泳时，蛋白样品堵在上样口
已经有14人回复
- 请教高手，萃取乳化后如何破乳？
已经有22人回复
- 求高手分析WB结果！！
已经有3人回复
- WB结果不理想，呼唤帮助
已经有20人回复
- 【求助】请教高手如何拟合这样的两组数据
已经有4人回复
- 请教高手这种折线图怎么做？
已经有27人回复
- 【求助】SAS编程出了错，看不懂，请教高手
已经有8人回复
- 【求助】由羧酸制酰胺，请教高手
已经有18人回复
- 【求助】请教高手：关于三个符号
已经有14人回复
- 【求助】请教高手关于核磁谱中积分的一个问题
已经有10人回复
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- BioEPI: 2
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17207.7
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14532
- 在线: 2186.2小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
2楼2014-05-30 11:12:40
liupeng0215 
新虫 (初入文坛)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 12.3
- 红花: 2
- 帖子: 17
- 在线: 4.9小时
- 虫号: 347637
- 注册: 2007-04-16
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
3楼2014-05-30 18:35:47
逍潇
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 45 (小学生)
- 金币: 5442.1
- 散金: 20
- 红花: 6
- 帖子: 1137
- 在线: 385.6小时
- 虫号: 487765
- 注册: 2007-12-28
- 性别: MM
- 专业: 化学环境污染与健康
4楼2014-05-31 18:50:59
阳阳的猫猫
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1086.6
- 帖子: 65
- 在线: 23.1小时
- 虫号: 3048565
- 注册: 2014-03-13
- 性别: MM
- 专业: 周围神经、神经-肌肉接头、
5楼2014-06-02 09:13:53
逍潇
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 45 (小学生)
- 金币: 5442.1
- 散金: 20
- 红花: 6
- 帖子: 1137
- 在线: 385.6小时
- 虫号: 487765
- 注册: 2007-12-28
- 性别: MM
- 专业: 化学环境污染与健康
6楼2014-06-02 10:54:01
grase 
捐助贵宾 (职业作家)
- 应助: 32 (小学生)
- 金币: 2011.7
- 散金: 1226
- 红花: 42
- 帖子: 3873
- 在线: 63小时
- 虫号: 826670
- 注册: 2009-08-12
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
7楼2014-06-03 08:46:17
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
★ ★ ★
youlinglyw: 金币+3 2014-07-18 12:54:29
youlinglyw: 金币+3 2014-07-18 12:54:29
|
WB背景高的可能原因与解决方法 1.洗膜不充分，增加洗涤液的体积和洗涤次数；在洗涤液中加入Tween=20。 2.二抗浓度过高，引起了一些非专一性的抗原-抗体相互作用，适当降低二抗浓度，可以分梯度进行。 3.二抗的识别抗原免疫簇不唯一，这是因为二抗是多克隆抗体，使用单克隆抗体的二抗，此时二抗的识别抗原免疫簇是唯一的，其非专一性的抗原-抗体相互作用会大为减少。当然，有时，单克隆抗体也会有识别抗原免疫簇不唯一，如果两种蛋白质的抗原免疫簇的结构很相近的话。如果不知道是不是二抗的识别抗原免疫簇不唯一，可以不加一抗的情况下只加二抗实验，可以检测出是否为二抗的的抗原免疫簇的识别的原因，若是的话，可以先更换封闭试剂，若无效，则要同时更换二抗。 4.封闭不充分，增加封闭液的封闭时间，适当提高温度，更换封闭液。 5.曝光过度，缩短曝光时间。 6.检测过程中膜干燥，保持充分的反应液，避免膜干燥。 7．若无别的选择，可尝试选择5%的脱脂奶粉，同时加入Tween=20。 8.滴定一抗或二抗的效价，找到一个产生清晰的信号强度可以接受的较低的抗体浓度。 9.缩短一抗和二抗的孵育时间。 |
8楼2014-07-18 10:28:06
