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demonsboy

金虫 (小有名气)

[求助] 求助酶联免疫的问题 已有5人参与

本人在做一种双抗体夹心法试剂盒,评估一对抗体时,采用抗体直接包板捕捉抗原显示,两种配对抗体可用,而借助亲和素包板,吸附生物素标记抗体,尔后再检测抗原时,这对抗体检测临床抗原效果却特别不理想,请问在这种情况下,调节反应缓冲液,可以解决问题吗,还是这对抗体本身不适合于亲和素间接包板,求大侠支招
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小王2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

大概知道你们做的系统是啥样子的 估计都是亲和素的板,第一步都是加生物素化的抗原抗体进去。检测临床样本不理想,具体是个什么情况?1. 有可能生物素化影响了抗体的活性,标记到了抗体的CDR区对抗原抗体结合形成了空间位阻。2.生物素化是随机与抗体的某些游离基团结合,可能结合到抗体的Fc端也可能结合到两个结合臂。所以被亲和素捕获后可能结合臂暴露在外 可能Fc暴露在外。这也会造成与直接包被反应性的不一致。3. 亲和素的板是否封闭完全也会影响结果。所以还是得根据你的结果调整。有些是可以根据调整缓冲液啥的可以调回来的。有些未必。
7楼2015-05-12 10:08:29
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hbl215

金虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定生物素标记抗体通过亲和素包被于板上?我猜是这步的问题,生物素分子量小,因为空间位阻作用,生物素与亲和素没有结合,导致捕获抗体并没有结合于板上,因此你后面效果也不好啦。
2楼2014-05-28 12:22:59
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demonsboy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-28 12:22:59
确定生物素标记抗体通过亲和素包被于板上?我猜是这步的问题,生物素分子量小,因为空间位阻作用,生物素与亲和素没有结合,导致捕获抗体并没有结合于板上,因此你后面效果也不好啦。

如果是这样的话,那应该所有的样本都检不出才对,而我的实验结果是有的临床可以检出,而有的却不行,谢谢~
3楼2014-05-29 15:48:59
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hbl215

金虫 (文坛精英)

呃。。,是这样结果的话,那我就不知道了,或者是有些样品的抗原表位被包在亲和素链里,哈哈,瞎想的,等高手解答,我也学习一下。
4楼2014-05-29 16:31:08
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