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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 求助酶联免疫的问题
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demonsboy

金虫 (小有名气)

[求助] 求助酶联免疫的问题已有5人参与

本人在做一种双抗体夹心法试剂盒，评估一对抗体时，采用抗体直接包板捕捉抗原显示，两种配对抗体可用，而借助亲和素包板，吸附生物素标记抗体，尔后再检测抗原时，这对抗体检测临床抗原效果却特别不理想，请问在这种情况下，调节反应缓冲液，可以解决问题吗，还是这对抗体本身不适合于亲和素间接包板，求大侠支招
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1楼2014-05-28 08:46:25
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hbl215

金虫 (文坛精英)
呃。。，是这样结果的话，那我就不知道了，或者是有些样品的抗原表位被包在亲和素链里，哈哈，瞎想的，等高手解答，我也学习一下。
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4楼2014-05-29 16:31:08
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hbl215

金虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定生物素标记抗体通过亲和素包被于板上？我猜是这步的问题，生物素分子量小，因为空间位阻作用，生物素与亲和素没有结合，导致捕获抗体并没有结合于板上，因此你后面效果也不好啦。
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2楼2014-05-28 12:22:59
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demonsboy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-28 12:22:59
确定生物素标记抗体通过亲和素包被于板上？我猜是这步的问题，生物素分子量小，因为空间位阻作用，生物素与亲和素没有结合，导致捕获抗体并没有结合于板上，因此你后面效果也不好啦。

如果是这样的话，那应该所有的样本都检不出才对，而我的实验结果是有的临床可以检出，而有的却不行，谢谢~
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3楼2014-05-29 15:48:59
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

既然直接包被抗体测定抗原的效果还可以的话，为什么还要加上生物素-链酶亲和素的系统呢？是为了放大信号，增加灵敏度？
增加了一个系统，就多了一分风险，生物素标记抗体，如果标记处理不好的话，就影响到整个反应体系了，所以能不用就不用吧。而且如果是为了增加灵敏度，还可以生物素-亲和素系统放在后面，即生物素标记原来的酶标抗体，链酶亲和素标记HRP。
如果一定要用生物素的话，建议选择侧链比较长的生物素，可以降低空间位阻对抗原抗体反应的影响。而且注意生物素标记抗体的方法不能有问题，最好是买生物素标记的试剂盒来标记生物素。
另外，你这是双抗体夹心法检测抗原，如果你的抗体都是鼠单抗的话，你要避免反应体系里的异嗜性干扰，即RF因子和HAMA对检测的影响，这种影响是会造成假阳性的。
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5楼2014-06-06 20:42:14
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