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demonsboy

金虫 (小有名气)

[求助] 求助酶联免疫的问题 已有5人参与

本人在做一种双抗体夹心法试剂盒,评估一对抗体时,采用抗体直接包板捕捉抗原显示,两种配对抗体可用,而借助亲和素包板,吸附生物素标记抗体,尔后再检测抗原时,这对抗体检测临床抗原效果却特别不理想,请问在这种情况下,调节反应缓冲液,可以解决问题吗,还是这对抗体本身不适合于亲和素间接包板,求大侠支招
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

既然直接包被抗体测定抗原的效果还可以的话,为什么还要加上生物素-链酶亲和素的系统呢?是为了放大信号,增加灵敏度?
增加了一个系统,就多了一分风险,生物素标记抗体,如果标记处理不好的话,就影响到整个反应体系了,所以能不用就不用吧。而且如果是为了增加灵敏度,还可以生物素-亲和素系统放在后面,即生物素标记原来的酶标抗体,链酶亲和素标记HRP。
如果一定要用生物素的话,建议选择侧链比较长的生物素,可以降低空间位阻对抗原抗体反应的影响。而且注意生物素标记抗体的方法不能有问题,最好是买生物素标记的试剂盒来标记生物素。
另外,你这是双抗体夹心法检测抗原,如果你的抗体都是鼠单抗的话,你要避免反应体系里的异嗜性干扰,即RF因子和HAMA对检测的影响,这种影响是会造成假阳性的。
5楼2014-06-06 20:42:14
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hbl215

金虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定生物素标记抗体通过亲和素包被于板上?我猜是这步的问题,生物素分子量小,因为空间位阻作用,生物素与亲和素没有结合,导致捕获抗体并没有结合于板上,因此你后面效果也不好啦。
2楼2014-05-28 12:22:59
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demonsboy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hbl215 at 2014-05-28 12:22:59
确定生物素标记抗体通过亲和素包被于板上?我猜是这步的问题,生物素分子量小,因为空间位阻作用,生物素与亲和素没有结合,导致捕获抗体并没有结合于板上,因此你后面效果也不好啦。

如果是这样的话,那应该所有的样本都检不出才对,而我的实验结果是有的临床可以检出,而有的却不行,谢谢~
3楼2014-05-29 15:48:59
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hbl215

金虫 (文坛精英)

呃。。,是这样结果的话,那我就不知道了,或者是有些样品的抗原表位被包在亲和素链里,哈哈,瞎想的,等高手解答,我也学习一下。
4楼2014-05-29 16:31:08
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