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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 免疫荧光效果不好
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小郭童鞋

铁虫 (正式写手)

[求助] 免疫荧光效果不好 已有3人参与

菜鸟一枚，免疫荧光做不出来，本身抗体特异性也不好，但是请问有什么优化的条件么？比如，延长封闭、一抗孵育时间什么的？感激不尽。。。
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1楼 2014-05-16 15:12:26
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果做WB特异性都不好的抗体就不要指望做IF了
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2楼2014-05-16 15:55:24
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小郭童鞋

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-16 15:55:24
如果做WB特异性都不好的抗体就不要指望做IF了

增强液的话可以做WB，就是IF之后要曝光将近4秒才有信号，所以这信号就没有说服力了，有可能已经过曝
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3楼2014-05-17 10:15:37
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junboliang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 做IF对抗体要求很高，所以尽可能找能做IF的抗体。
2. 做IF要设好阴性对照和阳性对照，阴性对照以排除抗体的非特异性结合，阳性对照可以帮你排除实验过程可能出现的问题。
3. IF的结果最好用共聚焦显微镜拍照。
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4楼2014-05-17 10:41:56
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huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细胞状态也是重要的环节
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5楼2014-05-17 10:46:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小郭童鞋 at 2014-05-17 10:15:37
增强液的话可以做WB，就是IF之后要曝光将近4秒才有信号，所以这信号就没有说服力了，有可能已经过曝...

看来你的目的蛋白量很少，需要特异性很好的抗体
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6楼2014-05-17 11:06:36
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小郭童鞋

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-17 10:41:56
1. 做IF对抗体要求很高，所以尽可能找能做IF的抗体。
2. 做IF要设好阴性对照和阳性对照，阴性对照以排除抗体的非特异性结合，阳性对照可以帮你排除实验过程可能出现的问题。
3. IF的结果最好用共聚焦显微镜拍照。

抗体应该是有点问题   阴性对照和阳性相同曝光时间也出现信号了    应该是过曝了
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7楼2014-05-17 11:27:04
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小郭童鞋

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huiting410 at 2014-05-17 10:46:11
细胞状态也是重要的环节

细胞是现抽现用的血细胞   目的蛋白量比较少吧应该
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8楼2014-05-17 11:28:52
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