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免疫组化，二抗选择 已有2人参与
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初次做免疫组化，一抗是neurofilament(神经丝蛋白NFM,兔多克隆抗体) 和 glial fibrillary acidic protein(神经胶质纤维酸性蛋白，GFAP,兔多克隆抗体)，荧光二抗分别选择什么？希望两种二抗一种标记绿荧光，另一种标记红荧光。 期待懂得人能指点一下！非常感谢！ |
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jiaolong11a
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137167741: 金币+2, BioEPI+1, 鼓励交流~~ 2014-02-23 12:50:07
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同样学习一下：二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。 |
4楼2014-02-21 09:15:01
jiaolong11a
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jurkat.1640
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jiaolong11a
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137167741: 金币+3, 鼓励交流~~ 2014-02-23 12:50:26
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不知道有帮助吗：在一些如胸腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞等细胞内，通常含有较多的Fc受体，这时候选择二抗时最好选择Anti-IgG, F（ab’）2 fragment这样的特异性二抗，这样就消除了由于Fc部分与IgG的非特异性结合。常规的Anti-IgG （H+L）二抗与IgG的重链和轻链都有结合反应，即与IgG的Fc的F（ab’）2片段都能结合；由于IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此Anti-IgG （H+L）与它们都有交叉反应。而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment经过了IgG Fc片段的吸附，因此只与IgG的F（ab’）2片段结合，然而IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此与它们也有交叉反应在一些特殊的实验里，只需要检测样本里的IgG或者IgM，常规的Anti-IgG （H+L）由于与IgG的重链和轻链都有结合反应，而IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此不能特异性的检测某种类型的IgG或者IgM。这时候就需要针对特殊类型Ig分子的二抗。按照标记分，有HRP、AP、生物素等标记二抗，FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等荧光二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、IgG（ab’）2等不同类型抗体 |
9楼2014-02-21 13:31:34
10楼2014-02-23 12:14:19
