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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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84146922

金虫 (小有名气)

[求助] 相关native page的想象的讨论 已有3人参与

我his柱纯化了一个蛋白,然后过凝胶柱,只有一个峰,将蛋白进行SDS-PAGE时候,有单一的目的带
而进行native-PAGE的时候,却有两条带,一条粗的带,应该是我的目的带,上面还有一条细带
如果那条细带是多聚体的形式存在,那么为什么过凝胶柱的时候却只有一个峰?
那个多聚体可能是在加入native-PAGE 的loading的时候,形成的多聚体吗?
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励交流! 2014-05-04 02:06:33
1.过亲和柱的时候,如果几个峰重叠在一起,那显示出来就是一个峰了。从同一个峰中收集的蛋白,跑电泳时有几条带很常见的。
2.聚体的形成可能在你上柱之前,只是洗脱的时候聚体峰和单体峰重叠了,所以看不出来。Ni柱亲和是根据His标签和Ni柱亲和力来分离的,而不是根据分子量大小来分的。
3.也有可能是蛋白纯化之后再形成聚体,未纯化的时候杂蛋白比较多,对聚体形成有影响,纯化后聚体形成比较容易。
2楼2014-05-03 22:54:11
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84146922

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-05-03 22:54:11
1.过亲和柱的时候,如果几个峰重叠在一起,那显示出来就是一个峰了。从同一个峰中收集的蛋白,跑电泳时有几条带很常见的。
2.聚体的形成可能在你上柱之前,只是洗脱的时候聚体峰和单体峰重叠了,所以看不出来。Ni柱 ...

你好,1、2、3都很有道理,谢谢~
但是我是先过了Ni柱,然后再过凝胶柱,是根据分子大小来分开的...
所以想再请问下....还是原问题,谢谢...
3楼2014-05-04 11:04:46
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 84146922 at 2014-05-04 11:04:46
你好,1、2、3都很有道理,谢谢~
但是我是先过了Ni柱,然后再过凝胶柱,是根据分子大小来分开的...
所以想再请问下....还是原问题,谢谢......

那就可能是在纯化之后page之前形成的聚体了。你先确认一下分子量是不是单体的整数倍,要对不上就有可能是其他原因了。
4楼2014-05-04 11:14:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑非变性胶电泳之后割胶就纯了
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-05-04 15:03:17
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heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目标条带上面的杂质,离目标条带有多远。可以确定是2聚体吗?凝胶层析柱虽然是一个峰,但不代表就是一种物质,同样你的凝胶柱是如何选择的,能够有效分离这2钟物质吗
6楼2014-05-04 21:58:00
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heylixing

铁虫 (正式写手)

就是普通的PAGE,跑个非还原的,就可以确定是不是多聚。
7楼2014-05-04 21:59:20
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84146922

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by heylixing at 2014-05-04 21:59:20
就是普通的PAGE,跑个非还原的,就可以确定是不是多聚。

你好,已经确认是多聚体形式存在了
native的时候解聚了部分,谢谢你的回答!
8楼2014-05-05 18:54:32
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