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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 相关native page的想象的讨论
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84146922

金虫 (小有名气)

[求助] 相关native page的想象的讨论 已有3人参与

我his柱纯化了一个蛋白，然后过凝胶柱，只有一个峰，将蛋白进行SDS-PAGE时候，有单一的目的带
而进行native-PAGE的时候，却有两条带，一条粗的带，应该是我的目的带，上面还有一条细带
如果那条细带是多聚体的形式存在，那么为什么过凝胶柱的时候却只有一个峰？
那个多聚体可能是在加入native-PAGE 的loading的时候，形成的多聚体吗？
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1楼 2014-05-03 21:40:34
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2014-05-04 02:06:33
1.过亲和柱的时候，如果几个峰重叠在一起，那显示出来就是一个峰了。从同一个峰中收集的蛋白，跑电泳时有几条带很常见的。
2.聚体的形成可能在你上柱之前，只是洗脱的时候聚体峰和单体峰重叠了，所以看不出来。Ni柱亲和是根据His标签和Ni柱亲和力来分离的，而不是根据分子量大小来分的。
3.也有可能是蛋白纯化之后再形成聚体，未纯化的时候杂蛋白比较多，对聚体形成有影响，纯化后聚体形成比较容易。
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2楼2014-05-03 22:54:11
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84146922

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-05-03 22:54:11
1.过亲和柱的时候，如果几个峰重叠在一起，那显示出来就是一个峰了。从同一个峰中收集的蛋白，跑电泳时有几条带很常见的。
2.聚体的形成可能在你上柱之前，只是洗脱的时候聚体峰和单体峰重叠了，所以看不出来。Ni柱 ...

你好，1、2、3都很有道理，谢谢~
但是我是先过了Ni柱，然后再过凝胶柱，是根据分子大小来分开的...
所以想再请问下....还是原问题，谢谢...
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3楼2014-05-04 11:04:46
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 84146922 at 2014-05-04 11:04:46
你好，1、2、3都很有道理，谢谢~
但是我是先过了Ni柱，然后再过凝胶柱，是根据分子大小来分开的...
所以想再请问下....还是原问题，谢谢......

那就可能是在纯化之后page之前形成的聚体了。你先确认一下分子量是不是单体的整数倍，要对不上就有可能是其他原因了。
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4楼2014-05-04 11:14:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑非变性胶电泳之后割胶就纯了
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-05-04 15:03:17
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heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目标条带上面的杂质，离目标条带有多远。可以确定是2聚体吗？凝胶层析柱虽然是一个峰，但不代表就是一种物质，同样你的凝胶柱是如何选择的，能够有效分离这2钟物质吗
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6楼2014-05-04 21:58:00
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heylixing

铁虫 (正式写手)
就是普通的PAGE，跑个非还原的，就可以确定是不是多聚。
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7楼2014-05-04 21:59:20
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84146922

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by heylixing at 2014-05-04 21:59:20
就是普通的PAGE，跑个非还原的，就可以确定是不是多聚。

你好，已经确认是多聚体形式存在了
native的时候解聚了部分，谢谢你的回答！
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8楼2014-05-05 18:54:32
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