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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » MTT做细胞毒性测试问题
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

[求助] MTT做细胞毒性测试问题 已有2人参与

我做纳米材料载盐酸阿霉素DOX进细胞，但是做MTT细胞毒性测试实验得到的数据里，加药孵化后数据与空白对照没有区别，孵化时间4h，12h，24h，48h都做过，结果还是一样，问题出在哪里呢？而且做24h和48h这两次的时候，加了MTT过4h后，细胞培养液变成了紫黑色，这是染菌了还是正常现象呢？
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1楼 2014-04-29 15:14:27
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hsingyu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
luo_jiaojiao: 金币+1, ★有帮助 2014-04-30 15:28:15
培养基变紫黑色，很大可能是染菌了，阿霉素装载之后做MTT要加阿霉素裸药作对照，或许你的浓度不够，不知道做的是哪种细胞？
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做最好的自己~
2楼2014-04-29 19:37:07
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我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luo_jiaojiao: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-30 15:28:05
呵呵，我课题组同学跟你做的很像，也是DOX。紫黑色的话只要是不太深就正常，要是黑的不透明就是染菌了。你的各浓度DOX不起作用可能是药物就没有在你的载体上。你用什么手段测试的你制备后的载体+DOX的？
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为爱而生
3楼2014-04-29 21:38:22
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hsingyu at 2014-04-29 19:37:07
培养基变紫黑色，很大可能是染菌了，阿霉素装载之后做MTT要加阿霉素裸药作对照，或许你的浓度不够，不知道做的是哪种细胞？

啊，真的是染菌啊……我加的是50ul的DOX和150ul的DMEM，最终药的浓度是5ug/ml,10ug/ml,20ug/ml,50ug/ml,100ug/ml，药的浓度达到50ug/ml后就有很多药吸附在板子上面，加MTT前洗好多遍都洗不掉呢，A549肺癌细胞。
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4楼2014-04-30 15:24:49
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-04-29 21:38:22
呵呵，我课题组同学跟你做的很像，也是DOX。紫黑色的话只要是不太深就正常，要是黑的不透明就是染菌了。你的各浓度DOX不起作用可能是药物就没有在你的载体上。你用什么手段测试的你制备后的载体+DOX的？

可能真的是染菌了，我之前把枪头弄掉在PBS里面了的……我直接加的free dox呢，之前加了好几次载药的材料都没现象，我就直接做free dox了。载药后有测紫外，然后做了confocal也有看到材料和药进细胞了，现在就是愁MTT啊
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5楼2014-04-30 15:27:47
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我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-04-30 15:27:47
可能真的是染菌了，我之前把枪头弄掉在PBS里面了的……我直接加的free dox呢，之前加了好几次载药的材料都没现象，我就直接做free dox了。载药后有测紫外，然后做了confocal也有看到材料和药进细胞了，现在就是愁M ...

你把培养液调成PH7.2左右再过滤，这样得到的medium大概7.3-7.4，我上学期培养基碳酸氢钠加的是1.5克，老是染菌。这学期改成3.7克怎么瞎搞都没事儿。上次配药忘了灭10微升枪头，直接酒精泡了泡就配药了，细胞没有染菌
还有要确认一下 药物（纳米颗粒）跟MTT反应吗？用不含血清的培基混合MTT然后给细胞加上会不会好点儿？
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为爱而生
6楼2014-05-02 09:25:02
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-05-02 09:25:02
你把培养液调成PH7.2左右再过滤，这样得到的medium大概7.3-7.4，我上学期培养基碳酸氢钠加的是1.5克，老是染菌。这学期改成3.7克怎么瞎搞都没事儿。上次配药忘了灭10微升枪头，直接酒精泡了泡就配药了，细胞没有染 ...

我们平时是从生物公司买了DMEM直接过滤了再加血清和双抗配成培养液使用，没有去调pH，感觉太麻烦了，反正癌细胞的生命力还是比较顽强的，呵呵。药物和MTT会不会反应应该怎么确认呢？种板之后加药诱导前，培养基已经换成仅DMEM的了，加MTT之前有先把旧培养基和药弃掉，加上新鲜DMEM，然后加的MTT。但是用酶标仪测出来的OD值跟空白对照的细胞一样啊……何解？
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7楼2014-05-05 14:18:35
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我听五月天

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-05 14:18:35
我们平时是从生物公司买了DMEM直接过滤了再加血清和双抗配成培养液使用，没有去调pH，感觉太麻烦了，反正癌细胞的生命力还是比较顽强的，呵呵。药物和MTT会不会反应应该怎么确认呢？种板之后加药诱导前，培养基已经 ...

感觉还是染菌可能性大。不调PH也可，只要碳酸氢钠按照DMEM盒子上要求的加就好了。如果是铺板后染菌的，那操作还是注意下吧。
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为爱而生
8楼2014-05-06 09:51:21
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-05-06 09:51:21
感觉还是染菌可能性大。不调PH也可，只要碳酸氢钠按照DMEM盒子上要求的加就好了。如果是铺板后染菌的，那操作还是注意下吧。...

染菌了会使得紫外吸收值增大吗？
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9楼2014-05-07 16:12:05
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我听五月天

木虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-07 16:12:05
染菌了会使得紫外吸收值增大吗？...

这个真不清楚，不过MTT对细菌敏感，估计染菌就肯定很不准
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为爱而生
10楼2014-05-07 22:40:01
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