24小时热门版块排行榜    

查看: 3785  |  回复: 14

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

[求助] MTT做细胞毒性测试问题 已有2人参与

我做纳米材料载盐酸阿霉素DOX进细胞,但是做MTT细胞毒性测试实验得到的数据里,加药孵化后数据与空白对照没有区别,孵化时间4h,12h,24h,48h都做过,结果还是一样,问题出在哪里呢?而且做24h和48h这两次的时候,加了MTT过4h后,细胞培养液变成了紫黑色,这是染菌了还是正常现象呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hsingyu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
luo_jiaojiao: 金币+1, 有帮助 2014-04-30 15:28:15
培养基变紫黑色,很大可能是染菌了,阿霉素装载之后做MTT要加阿霉素裸药作对照,或许你的浓度不够,不知道做的是哪种细胞?
做最好的自己~
2楼2014-04-29 19:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
luo_jiaojiao: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-30 15:28:05
呵呵,我课题组同学跟你做的很像,也是DOX。紫黑色的话只要是不太深就正常,要是黑的不透明就是染菌了。你的各浓度DOX不起作用可能是药物就没有在你的载体上。你用什么手段测试的你制备后的载体+DOX的?
为爱而生
3楼2014-04-29 21:38:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hsingyu at 2014-04-29 19:37:07
培养基变紫黑色,很大可能是染菌了,阿霉素装载之后做MTT要加阿霉素裸药作对照,或许你的浓度不够,不知道做的是哪种细胞?

啊,真的是染菌啊……我加的是50ul的DOX和150ul的DMEM,最终药的浓度是5ug/ml,10ug/ml,20ug/ml,50ug/ml,100ug/ml,药的浓度达到50ug/ml后就有很多药吸附在板子上面,加MTT前洗好多遍都洗不掉呢,A549肺癌细胞。
4楼2014-04-30 15:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-04-29 21:38:22
呵呵,我课题组同学跟你做的很像,也是DOX。紫黑色的话只要是不太深就正常,要是黑的不透明就是染菌了。你的各浓度DOX不起作用可能是药物就没有在你的载体上。你用什么手段测试的你制备后的载体+DOX的?

可能真的是染菌了,我之前把枪头弄掉在PBS里面了的……我直接加的free dox呢,之前加了好几次载药的材料都没现象,我就直接做free dox了。载药后有测紫外,然后做了confocal也有看到材料和药进细胞了,现在就是愁MTT啊
5楼2014-04-30 15:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-04-30 15:27:47
可能真的是染菌了,我之前把枪头弄掉在PBS里面了的……我直接加的free dox呢,之前加了好几次载药的材料都没现象,我就直接做free dox了。载药后有测紫外,然后做了confocal也有看到材料和药进细胞了,现在就是愁M ...

你把培养液调成PH7.2左右再过滤,这样得到的medium大概7.3-7.4,我上学期培养基碳酸氢钠加的是1.5克,老是染菌。这学期改成3.7克怎么瞎搞都没事儿。上次配药忘了灭10微升枪头,直接酒精泡了泡就配药了,细胞没有染菌
还有要确认一下 药物(纳米颗粒)跟MTT反应吗?用不含血清的培基混合MTT然后给细胞加上会不会好点儿?
为爱而生
6楼2014-05-02 09:25:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-05-02 09:25:02
你把培养液调成PH7.2左右再过滤,这样得到的medium大概7.3-7.4,我上学期培养基碳酸氢钠加的是1.5克,老是染菌。这学期改成3.7克怎么瞎搞都没事儿。上次配药忘了灭10微升枪头,直接酒精泡了泡就配药了,细胞没有染 ...

我们平时是从生物公司买了DMEM直接过滤了再加血清和双抗配成培养液使用,没有去调pH,感觉太麻烦了,反正癌细胞的生命力还是比较顽强的,呵呵。药物和MTT会不会反应应该怎么确认呢?种板之后加药诱导前,培养基已经换成仅DMEM的了,加MTT之前有先把旧培养基和药弃掉,加上新鲜DMEM,然后加的MTT。但是用酶标仪测出来的OD值跟空白对照的细胞一样啊……何解?
7楼2014-05-05 14:18:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-05 14:18:35
我们平时是从生物公司买了DMEM直接过滤了再加血清和双抗配成培养液使用,没有去调pH,感觉太麻烦了,反正癌细胞的生命力还是比较顽强的,呵呵。药物和MTT会不会反应应该怎么确认呢?种板之后加药诱导前,培养基已经 ...

感觉还是染菌可能性大。不调PH也可,只要碳酸氢钠按照DMEM盒子上要求的加就好了。如果是铺板后染菌的,那操作还是注意下吧。
为爱而生
8楼2014-05-06 09:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-05-06 09:51:21
感觉还是染菌可能性大。不调PH也可,只要碳酸氢钠按照DMEM盒子上要求的加就好了。如果是铺板后染菌的,那操作还是注意下吧。...

染菌了会使得紫外吸收值增大吗?
9楼2014-05-07 16:12:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-07 16:12:05
染菌了会使得紫外吸收值增大吗?...

这个真不清楚,不过MTT对细菌敏感,估计染菌就肯定很不准
为爱而生
10楼2014-05-07 22:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luo_jiaojiao 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 06:40 by gy1nBQXYQJqL
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +4 gouxfjh 2026-08-28 4/200 2026-08-29 04:46 by alongwaytogo
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见