24小时热门版块排行榜    

查看: 2026  |  回复: 6

jiangxincsu

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么使用改变PH使蛋白变性,要在相应的缓冲buffer里? 已有2人参与

我的蛋白是无结构的,有杂蛋白不好分离
我想试2种方法纯化蛋白
1、调节PH到目的蛋白等电点,使目标蛋白沉淀,然后分离
2、我的蛋白比较耐酸,调低PH使其他杂蛋白沉淀,然后分离
但是师姐说调节PH必须要在相应PH的缓冲buffer里,我觉得不明白,因为PH的改变是影响蛋白的-COOH .NH2的H离子的解离,从而改变蛋白质的带点破环胶体的水化层,然后聚集沉淀的,这样不是只和溶液的H离子浓度有关吗?(ps我本科学化学的,师姐是学生物的,她解释不通)
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jiangxincsu: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-02 14:38:10
是应该在缓冲Buffer,这样是为了使其PH变化不会太快,试想一个鸡蛋扔石头上好些,还是扔海绵上好些。
     希望对你有帮助。
2楼2014-04-29 11:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangxincsu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-04-29 11:16:10
是应该在缓冲Buffer,这样是为了使其PH变化不会太快,试想一个鸡蛋扔石头上好些,还是扔海绵上好些。
     希望对你有帮助。

谢谢您的回复,还有2个问题请教一下哦
1、那么如果我想在强酸体系下让蛋白变性,还要用buffer吗?
2、五结构蛋白如果在强酸下变性,会失去活性吗?
3楼2014-04-29 20:47:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jiangxincsu at 2014-04-29 20:47:35
谢谢您的回复,还有2个问题请教一下哦
1、那么如果我想在强酸体系下让蛋白变性,还要用buffer吗?
2、五结构蛋白如果在强酸下变性,会失去活性吗?...

要用buffer,强酸会与氨基酸的氨基发生作用,使其变性,发生不可逆失活。如果你要纯化目的蛋白,最好用盐析。
4楼2014-04-30 09:25:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangxincsu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-04-30 09:25:13
要用buffer,强酸会与氨基酸的氨基发生作用,使其变性,发生不可逆失活。如果你要纯化目的蛋白,最好用盐析。...

我已经试过盐析了,用的8mol的尿素,可是目的蛋白和杂蛋白都没有析出。
请问你还有什么比较好的分离方法吗?
5楼2014-05-02 14:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
jiangxincsu: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-05 20:20:35
8M尿素是很强的蛋白变性剂了,蛋白在其中溶解性很好的,跟等电点没有太大关系,可以尝试降低尿素浓度如1M,甚至不加尿素的buffer
爱拼才会赢
6楼2014-05-03 19:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢持续的帮助 2014-05-04 08:51:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiangxincsu at 2014-05-02 14:40:45
我已经试过盐析了,用的8mol的尿素,可是目的蛋白和杂蛋白都没有析出。
请问你还有什么比较好的分离方法吗?...

用吸附性树脂试试
7楼2014-05-04 08:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangxincsu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
信息提示
请填处理意见