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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 为什么使用改变PH使蛋白变性，要在相应的缓冲buffer里？
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么使用改变PH使蛋白变性，要在相应的缓冲buffer里？ 已有2人参与

我的蛋白是无结构的，有杂蛋白不好分离
我想试2种方法纯化蛋白
1、调节PH到目的蛋白等电点，使目标蛋白沉淀，然后分离
2、我的蛋白比较耐酸，调低PH使其他杂蛋白沉淀，然后分离
但是师姐说调节PH必须要在相应PH的缓冲buffer里，我觉得不明白，因为PH的改变是影响蛋白的-COOH .NH2的H离子的解离，从而改变蛋白质的带点破环胶体的水化层，然后聚集沉淀的，这样不是只和溶液的H离子浓度有关吗？（ps我本科学化学的，师姐是学生物的，她解释不通）
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1楼 2014-04-29 09:15:14
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiangxincsu: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-02 14:38:10
是应该在缓冲Buffer，这样是为了使其PH变化不会太快，试想一个鸡蛋扔石头上好些，还是扔海绵上好些。
     希望对你有帮助。
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2楼2014-04-29 11:16:10
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-04-29 11:16:10
是应该在缓冲Buffer，这样是为了使其PH变化不会太快，试想一个鸡蛋扔石头上好些，还是扔海绵上好些。
     希望对你有帮助。

谢谢您的回复，还有2个问题请教一下哦
1、那么如果我想在强酸体系下让蛋白变性，还要用buffer吗？
2、五结构蛋白如果在强酸下变性，会失去活性吗？
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3楼2014-04-29 20:47:35
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiangxincsu at 2014-04-29 20:47:35
谢谢您的回复，还有2个问题请教一下哦
1、那么如果我想在强酸体系下让蛋白变性，还要用buffer吗？
2、五结构蛋白如果在强酸下变性，会失去活性吗？...

要用buffer,强酸会与氨基酸的氨基发生作用，使其变性，发生不可逆失活。如果你要纯化目的蛋白，最好用盐析。
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4楼2014-04-30 09:25:13
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-04-30 09:25:13
要用buffer,强酸会与氨基酸的氨基发生作用，使其变性，发生不可逆失活。如果你要纯化目的蛋白，最好用盐析。...

我已经试过盐析了，用的8mol的尿素，可是目的蛋白和杂蛋白都没有析出。
请问你还有什么比较好的分离方法吗？
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5楼2014-05-02 14:40:45
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
jiangxincsu: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-05 20:20:35
8M尿素是很强的蛋白变性剂了，蛋白在其中溶解性很好的，跟等电点没有太大关系，可以尝试降低尿素浓度如1M，甚至不加尿素的buffer
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爱拼才会赢
6楼2014-05-03 19:53:26
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢持续的帮助 2014-05-04 08:51:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiangxincsu at 2014-05-02 14:40:45
我已经试过盐析了，用的8mol的尿素，可是目的蛋白和杂蛋白都没有析出。
请问你还有什么比较好的分离方法吗？...

用吸附性树脂试试
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7楼2014-05-04 08:46:18
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