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lpw106

银虫 (小有名气)

[交流] HIC层析缓冲液pH对分离的影响 已有3人参与

我在一些资料上看到,HIC层析buffer对选择性和出峰时间有影响,我没做过pH的条件,请问有没有做过相关条件的大侠,我想确认一下。有详细的建议更好。
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落满夏天

银虫 (正式写手)

★
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你做的是纯化吗?PH会有一定影响,另外就是离子强度,PH可以设置一定的梯度筛选一下。个人觉得PH会影响带电。
星星之火,可以燎原
2楼2011-12-06 15:02:24
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jacobgo

金虫 (小有名气)

★
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引用回帖:
1楼: Originally posted by lpw106 at 2011-12-06 13:13:53:
我在一些资料上看到,HIC层析buffer对选择性和出峰时间有影响,我没做过pH的条件,请问有没有做过相关条件的大侠,我想确认一下。有详细的建议更好。

pH会影响到蛋白质的疏水性,一般情况而言,近蛋白等电点时,蛋白的疏水性强点,在HIC上保留会强点,从而对选择性和出峰时间都会有影响。
路遥远,我们一起走
3楼2011-12-07 08:15:20
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

★
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主要是影响蛋白质本身的疏水性。但是疏水填料本身对PH没有什么要求,只要在工作PH范围内就可以了。
个人经验觉得PH对HIC的影响不大,其是通过高盐使蛋白疏水基团暴露,PH的影响不能说没有,但觉得不是主要影响因素。温度对HIC的柱行为倒是会有影响,可以关注一下。
4楼2011-12-07 11:56:20
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