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汗灰

新虫 (初入文坛)

[求助] 利用考马斯亮蓝G-250测定绘制牛血清蛋白的标准曲线 已有1人参与

查了很多资料,基本上说的都是取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇中,再加100ml85%的磷酸,用蒸馏水稀释到1L。我觉得实验需要的量不是很多就用100ml容量瓶配制了,所有物质的量都按比例缩小10倍。

一系列标准溶液的配制:用BSA配制1mg/ml的标准蛋白质溶液;取七个25ml的容量瓶,分别标号为1、2、3、4、5、6、7,分别加入样品、试剂,即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入0、2、4、8、12、16、20ml,然后向各容量瓶中分别加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂,并立即摇匀,最后用蒸馏水补充到25ml。
用第5号容量瓶里的标准溶液分别在580nm、585nm、590nm、595nm、600nm、605nm、610nm测定吸光度,得出最大吸收波长为595nm,以1号为对照,测出的吸光度如下:0、0.105、0.134、0.142、0.146、0.161、0.137。很失败诶,做了两次都差不多的数据,不知道为什么。
还有我没有过滤过考马斯亮蓝溶液,是蓝色的。
另外牛血清蛋白标准溶液配制的时候,有产生泡沫一样的东西,怎么定容啊?

新虫求虫哥哥虫姐姐们支招(穷虫虫现在没金币可撒哦,见谅么么哒
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是昨天测的考马斯蓝,定容的时候轻轻的往里面加溶液,起泡泡了就用玻璃棒触碰就破了。但是动作一定要轻
2楼2014-07-26 09:15:45
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