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icercheaer

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌细菌质粒转染试验的一些小问题 已有1人参与

  我们拿到一个有特定基因的片段,然后想要转染进入感受态大肠杆菌里。
  我们的老板让我们计算如果这个细菌的转化效率是10^8 cfu/μg,
  质粒的浓度是 50ng / ul,如果加1ul 质粒,
  需要一个平板上只长出100个克隆,方便我们挑
  那该加多少ul的大肠杆菌呢??

  另外还让我们找阳性克隆,那阳性克隆该找什么呢?
  只知道 原来那个是利用氨苄抗性什么的筛选的阳性克隆,T T……
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
找阳性克隆,就是在培养基里加入载体上携带的抗性基因的对应抗生素。
感受态我一般是100 ul加900 ul LB摇完菌以后,离心,留100 ul涂4个平板,平均每个平板涂25 ul。
2楼2014-03-31 10:51:17
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icercheaer

铜虫 (小有名气)

啊说错了,不是找阳性克隆说错了……是找阳性对照……
3楼2014-03-31 10:54:25
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