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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 关于大肠杆菌细菌质粒转染试验的一些小问题
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icercheaer

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌细菌质粒转染试验的一些小问题 已有1人参与

　　我们拿到一个有特定基因的片段，然后想要转染进入感受态大肠杆菌里。
　　我们的老板让我们计算如果这个细菌的转化效率是10^8 cfu/μg，
　　质粒的浓度是 50ng / ul，如果加1ul 质粒，
　　需要一个平板上只长出100个克隆，方便我们挑
　　那该加多少ul的大肠杆菌呢？？

　　另外还让我们找阳性克隆，那阳性克隆该找什么呢？
　　只知道 原来那个是利用氨苄抗性什么的筛选的阳性克隆，T T……
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1楼 2014-03-31 10:10:43
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
找阳性克隆，就是在培养基里加入载体上携带的抗性基因的对应抗生素。
感受态我一般是100 ul加900 ul LB摇完菌以后，离心，留100 ul涂4个平板，平均每个平板涂25 ul。
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2楼2014-03-31 10:51:17
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icercheaer

铜虫 (小有名气)
啊说错了，不是找阳性克隆说错了……是找阳性对照……
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3楼2014-03-31 10:54:25
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