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1楼 2014-03-27 23:18:25

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d00614028

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永峰1230: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-28 13:46:51

一定要在摇床上晃动，常温最好不要过夜，一般封闭常温半小时，一抗2h，二抗1.5h，如果一抗二抗特异性不好也可以再一抗二抗孵育时在一抗二抗中加入奶粉。不懂的可以再问。

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永峰1230

3楼2014-03-28 09:09:05

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封闭用5%脱脂牛奶溶于PBST中，转膜后将膜上甲醇晾干，封闭待膜湿透后，一小时到两小时。
一抗，溶于3%BSA，4度过夜，二抗溶于3%脱脂牛奶，45min室温

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永峰1230

7楼2014-03-28 19:52:56

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永峰1230: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢oo，， 2014-03-29 11:18:13

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8楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-03-28 21:47:26
请问，辣根过氧化酶有抗兔的吗？你的显色怎么做的呢？用紫外凝胶成像系统（就是拍摄琼脂糖凝胶-EB染色　的　装置）　能拍照吗？...

当然有抗兔的二抗啊，而且二抗一般比较便宜，国内的公司二抗做的也比较好。
关于显影的话，我用过bio-Rad的成像系统，就是你讲的所谓拍DNA胶的仪器，不过你要看看那个仪器的相机怎么样，有的仪器只能针对DNA成像系统起作用（相机灵敏度不高），有的相机比较好，可以对DNA凝胶成像和western成像都能用，不过我后来换成暗室用胶片曝光，用自动洗片机洗胶片，然后扫描，用胶片曝光的灵敏度比相机成像要高很多，有的表达量滴的蛋白在相机成像看不到条带，但是用胶片曝光能得到很好的条带。推荐用胶片曝光。

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9楼2014-03-28 22:15:01

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永峰1230: 金币+2, ★★★很有帮助, 璋㈣阿 2014-03-29 15:41:26

引用回帖:

10楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-03-29 11:18:44
老师说，，显色后可以扫描这个可以吗...

可以的，曝光之后显影定影的胶片可以扫描到电脑，然后photoshop处理一下就可以放到文章里了

11楼2014-03-29 11:23:17

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2楼2014-03-28 00:43:00

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3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 09:09:05
一定要在摇床上晃动，常温最好不要过夜，一般封闭常温半小时，一抗2h，二抗1.5h，如果一抗二抗特异性不好也可以再一抗二抗孵育时在一抗二抗中加入奶粉。不懂的可以再问。

请问，，脱脂奶粉有什么要求吗，？

4楼2014-03-28 13:47:18

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4楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-03-28 13:47:18
请问，，脱脂奶粉有什么要求吗，？...

我买的是伊利的脱脂奶粉，就在超市买的，记得包装袋是红颜色的。浓度我用过最高的是0.5%，最低的是0.2%。

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5楼2014-03-28 13:57:05

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???????:

5?: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 13:57:05
?????????????????????????????????????????????????????ù???????0.5%????????0.2%??...

请问，辣根过氧化酶有抗兔的???，，你???的时候是用什么显色的呢

[ ????С??????? ]

6楼2014-03-28 19:06:56

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5楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 13:57:05
我买的是伊利的脱脂奶粉，就在超市买的，记得包装袋是红颜色的。浓度我用过最高的是0.5%，最低的是0.2%。...

请问，辣根过氧化酶有抗兔的吗？你的显色怎么做的呢？用紫外凝胶成像系统（就是拍摄琼脂糖凝胶-EB染色　的　装置）　能拍照吗？

8楼2014-03-28 21:47:26

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9楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 22:15:01
当然有抗兔的二抗啊，而且二抗一般比较便宜，国内的公司二抗做的也比较好。
关于显影的话，我用过bio-Rad的成像系统，就是你讲的所谓拍DNA胶的仪器，不过你要看看那个仪器的相机怎么样，有的仪器只能针对DNA成像系 ...

老师说，，显色后可以扫描这个可以吗