应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 封闭，一抗，二抗时的温度 时间
172/2返回列表上一页12
查看: 10216  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
永峰1230: 金币+2, ★★★很有帮助, 璋㈣阿 2014-03-29 15:41:26
引用回帖:
10楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-03-29 11:18:44
老师说，，显色后  可以扫描    这个可以吗...

可以的，曝光之后显影定影的胶片可以扫描到电脑，然后photoshop处理一下就可以放到文章里了
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2014-03-29 11:23:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 09:09:05
一定要在摇床上晃动，常温最好不要过夜，一般封闭常温半小时，一抗2h，二抗1.5h，如果一抗二抗特异性不好也可以再一抗二抗孵育时在一抗二抗中加入奶粉。不懂的可以再问。

请问 ，  一抗结合的 是 牛乳中 酪蛋白，，请问  封闭液 还能用  含 脱脂奶粉 的 TBST 吗？？

二抗用 辣根过氧化酶 标记   --- 显色底物 使用  TMB   能够自己配制吗？  应该需要怎么配制 呢
赞一下 回复此楼
12
12楼2014-04-01 17:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 22:15:01
当然有抗兔的二抗啊，而且二抗一般比较便宜，国内的公司二抗做的也比较好。
关于显影的话，我用过bio-Rad的成像系统，就是你讲的所谓拍DNA胶的仪器，不过你要看看那个仪器的相机怎么样，有的仪器只能针对DNA成像系 ...

请问     一抗结合的 是 牛乳中 酪蛋白，，请问  封闭液 还能用  含 脱脂奶粉 的 TBST 吗？？

二抗用 辣根过氧化酶 标记   --- 显色底物 使用  TMB   能够自己配制吗？  应该需要怎么配制 呢
赞一下 回复此楼
12
13楼2014-04-01 17:25:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xscljl

银虫 (初入文坛)
封闭时常用5%的脱脂牛奶溶液，用PBST配制。一抗及二抗时必须摇动，使膜与抗体充分接触。另外尽量不要在室温过夜，防止抗体buffer变性和抗体快速失效。
赞一下 回复此楼
14楼2014-04-01 20:00:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by weskerZXC at 2014-03-28 19:52:56
封闭用5%脱脂牛奶溶于PBST中，转膜后将膜上甲醇晾干，封闭待膜湿透后，一小时到两小时。
一抗，溶于3%BSA，4度过夜，二抗溶于3%脱脂牛奶，45min室温

请问 ，，所有的试剂 是不是 都需要 用 双蒸水 配制呢？  还是 用什么 水
赞一下 回复此楼
12
15楼2014-04-02 16:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by weskerZXC at 2014-03-28 19:52:56
封闭用5%脱脂牛奶溶于PBST中，转膜后将膜上甲醇晾干，封闭待膜湿透后，一小时到两小时。
一抗，溶于3%BSA，4度过夜，二抗溶于3%脱脂牛奶，45min室温

请问，一抗，溶于3%BSA，  BSA 是用 TBST 定容吗？
赞一下 回复此楼
12
16楼2014-04-12 13:52:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weskerZXC

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-04-12 13:52:29
请问，一抗，溶于3%BSA，  BSA 是用 TBST 定容吗？...

对，是用TBST定容的，我们所有试剂一般都用双蒸水，最好是，用起来放心
赞一下 回复此楼
17楼2014-04-13 08:49:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 永峰1230 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 5/250 2026-08-24 21:51 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭