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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 封闭，一抗，二抗时的温度 时间
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
永峰1230: 金币+2, ★★★很有帮助, 璋㈣阿 2014-03-29 15:41:26
引用回帖:
10楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-03-29 11:18:44
老师说，，显色后  可以扫描    这个可以吗...

可以的，曝光之后显影定影的胶片可以扫描到电脑，然后photoshop处理一下就可以放到文章里了
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11楼2014-03-29 11:23:17
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 09:09:05
一定要在摇床上晃动，常温最好不要过夜，一般封闭常温半小时，一抗2h，二抗1.5h，如果一抗二抗特异性不好也可以再一抗二抗孵育时在一抗二抗中加入奶粉。不懂的可以再问。

请问 ，  一抗结合的 是 牛乳中 酪蛋白，，请问  封闭液 还能用  含 脱脂奶粉 的 TBST 吗？？

二抗用 辣根过氧化酶 标记   --- 显色底物 使用  TMB   能够自己配制吗？  应该需要怎么配制 呢
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12
12楼2014-04-01 17:23:53
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 22:15:01
当然有抗兔的二抗啊，而且二抗一般比较便宜，国内的公司二抗做的也比较好。
关于显影的话，我用过bio-Rad的成像系统，就是你讲的所谓拍DNA胶的仪器，不过你要看看那个仪器的相机怎么样，有的仪器只能针对DNA成像系 ...

请问     一抗结合的 是 牛乳中 酪蛋白，，请问  封闭液 还能用  含 脱脂奶粉 的 TBST 吗？？

二抗用 辣根过氧化酶 标记   --- 显色底物 使用  TMB   能够自己配制吗？  应该需要怎么配制 呢
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13楼2014-04-01 17:25:26
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xscljl

银虫 (初入文坛)
封闭时常用5%的脱脂牛奶溶液，用PBST配制。一抗及二抗时必须摇动，使膜与抗体充分接触。另外尽量不要在室温过夜，防止抗体buffer变性和抗体快速失效。
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14楼2014-04-01 20:00:40
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by weskerZXC at 2014-03-28 19:52:56
封闭用5%脱脂牛奶溶于PBST中，转膜后将膜上甲醇晾干，封闭待膜湿透后，一小时到两小时。
一抗，溶于3%BSA，4度过夜，二抗溶于3%脱脂牛奶，45min室温

请问 ，，所有的试剂 是不是 都需要 用 双蒸水 配制呢？  还是 用什么 水
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12
15楼2014-04-02 16:39:10
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by weskerZXC at 2014-03-28 19:52:56
封闭用5%脱脂牛奶溶于PBST中，转膜后将膜上甲醇晾干，封闭待膜湿透后，一小时到两小时。
一抗，溶于3%BSA，4度过夜，二抗溶于3%脱脂牛奶，45min室温

请问，一抗，溶于3%BSA，  BSA 是用 TBST 定容吗？
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16楼2014-04-12 13:52:29
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weskerZXC

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-04-12 13:52:29
请问，一抗，溶于3%BSA，  BSA 是用 TBST 定容吗？...

对，是用TBST定容的，我们所有试剂一般都用双蒸水，最好是，用起来放心
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17楼2014-04-13 08:49:48
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