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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

[求助] 摸索免疫荧光一抗和二抗浓度后,哪些因素会影响以上浓度??

本人现在要做免疫荧光,先要摸一抗和二抗的浓度,我要做大鼠脊髓冰冻切片,摸好浓度后,是不是我所有的大鼠都用这个浓度,会有其他影响因素吗,还是就是摸一抗和二抗的合适比例,我怕做正式大鼠脊髓的时候又要重新摸浓度。希望高手给点提醒,十分感谢
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 如果你的切片多的话,直接用切片摸条件,否则很可能重来
2.一抗几个浓度, 二抗浓度略高, 选定一抗浓度后,
3.一抗定浓度,二抗几个浓度, 选最好的组合,以后全用这个做
shine
2楼2013-01-09 12:47:28
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-09 12:47:28
1. 如果你的切片多的话,直接用切片摸条件,否则很可能重来
2.一抗几个浓度, 二抗浓度略高, 选定一抗浓度后,
3.一抗定浓度,二抗几个浓度, 选最好的组合,以后全用这个做

如果有许多的话,切片如何保存,保存多久?
3楼2013-01-09 14:30:16
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淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果完全没有经验,一抗先用1:50,二抗一般1:200就好,推荐invitrogen的二抗Alexa Fluor系列,最好找个你的蛋白表达丰度高的组织做个阳性对照,同时用不加一抗的封闭液做隐形对照,如果你用的一抗是进口牌子,认真看说明书就好
4楼2013-01-09 21:20:41
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淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

冰冻切片4度保存一周,-20 一两个月,-80 半年到一年
5楼2013-01-09 21:23:25
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