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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 摸索免疫荧光一抗和二抗浓度后，哪些因素会影响以上浓度？？
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

[求助] 摸索免疫荧光一抗和二抗浓度后，哪些因素会影响以上浓度？？

本人现在要做免疫荧光，先要摸一抗和二抗的浓度，我要做大鼠脊髓冰冻切片，摸好浓度后，是不是我所有的大鼠都用这个浓度，会有其他影响因素吗，还是就是摸一抗和二抗的合适比例，我怕做正式大鼠脊髓的时候又要重新摸浓度。希望高手给点提醒，十分感谢
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1楼 2013-01-08 22:43:35
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淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果完全没有经验，一抗先用1：50，二抗一般1：200就好，推荐invitrogen的二抗Alexa Fluor系列，最好找个你的蛋白表达丰度高的组织做个阳性对照，同时用不加一抗的封闭液做隐形对照，如果你用的一抗是进口牌子，认真看说明书就好
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4楼2013-01-09 21:20:41
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 如果你的切片多的话，直接用切片摸条件，否则很可能重来
2.一抗几个浓度， 二抗浓度略高， 选定一抗浓度后，
3.一抗定浓度，二抗几个浓度， 选最好的组合，以后全用这个做
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shine
2楼2013-01-09 12:47:28
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-09 12:47:28
1. 如果你的切片多的话，直接用切片摸条件，否则很可能重来
2.一抗几个浓度， 二抗浓度略高， 选定一抗浓度后，
3.一抗定浓度，二抗几个浓度， 选最好的组合，以后全用这个做

如果有许多的话，切片如何保存，保存多久？
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3楼2013-01-09 14:30:16
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淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

冰冻切片4度保存一周，-20 一两个月，-80 半年到一年
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5楼2013-01-09 21:23:25
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