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yuanzou2011新虫 (初入文坛)
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[求助]
基因亚细胞定位
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各位大虫，有个问题急着想要请教一下！我用pBEGFP载体构建的重组基因，目的基因均在1800-2000bp，将够好的重组基因转入GV3101农杆菌，然后侵染烟草叶片，2天后观察。结果只有对照（只有pBEGFP载体）的蛋白有表达，其它基因都没有荧光。具体步骤如下： 1）、吸取已转入目的重组基因的农杆菌菌液300 μL 到3 ml含有50 mg/ml卡那霉素和50 mg/ml潮霉素的液体培养基中培养，直至OD600=0.5～0.6，约2h。 2）、取上述菌液1.5 ml离心，去上清液，加1 ml诱导液，置于28℃温育2 h。诱导液的配制：1 ml 0.1 M MES buffer, pH 5.6；0.1 ml 1 M MgCl2；30 μL 50 mM acelosyringone (acetophenone)；加无菌水至10 ml。 3）、取50 μL 上一步所得菌液于1.5 ml离心管中，再加入950 μL 诱导液，测OD600，调OD600=0.1～1.0。 4）、将上一步所得菌液注射3个星期大的烟草叶片。 5）、48 h后，剪取小块经注射的烟草叶片与荧光显微镜下观看荧光反应。 怎么优化一下实验条件呢，各位大虫，非常感激哦！ |
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