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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 原生质体融合问题求助！
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集气瓶

铁虫 (小有名气)

[求助] 原生质体融合问题求助！ 已有3人参与

各位好，我在一篇文献中看到关于原生质体融合技术的问题，其中提到“在紫外照射下原生质体致死率随着时间变长逐渐变大，在5min 时其致死率为93.9%，10min 时为100%;同样随着加热时间变长致死率也逐渐上升，在60min 时其致死率为95.2%，当到达90min 时为100%。综上我们选择紫外照射10min，热致死90min 来灭活亲本原生质体开展下一步融合工作。”
      1、这里想请教一下，如果两种致死率都达到100%了，那融合后怎么还能长出菌落？原生质体不都死亡了吗？
      2、这里的致死率计算方法是不是紫外或者热处理完毕后，将原生质体转移到高渗溶液中，然后根据长出来的菌落数和对照进行对比，从而计算出致死率啊？
       3、计算原生质体形成率的时候是不是都是利用血球计数板观察原生质体形态：细胞变得比较圆的就行原生质体，细胞跟之前形态差不多的就是没有成功去壁的细胞？
      以上三个问题希望有朋友解答一下，谢谢了！
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永远的阿森纳！
1楼 2014-02-26 21:25:29
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集气瓶

铁虫 (小有名气)
再请教一个问题，原生质体融合只能两种细胞吗？如果我有A、B、C三种细胞都得到了原生质体，然后融合在一起后，会出现ABC三种细胞融合在一起的现象吗？如果存在，是不是只能是三个细胞融合在一起？而不能是多个A细胞、多个B细胞和多个C细胞融合在一起？
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永远的阿森纳！
2楼2014-02-26 21:43:53
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-05-19 08:51:22
他是双亲灭活，即一部分基因突变，死；一部分蛋白酶热失活，死。两者融合，互补，可能成活。
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3楼2014-02-27 08:12:57
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集气瓶

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by virty76 at 2014-02-27 08:12:57
他是双亲灭活，即一部分基因突变，死；一部分蛋白酶热失活，死。两者融合，互补，可能成活。

谢谢啊，然后还有其他问题您能帮我再解答一下吗，嘿嘿！
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永远的阿森纳！
4楼2014-02-27 13:45:59
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robocop

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-19 08:51:29
1.正常原生质体和紫外线处理了的原生质体的融合叫胞质融合，正常的能够获得处理了的 细胞质。
2.处理完了后 应该直接用FDA染色来统计致死率吧。
3. 对
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纵然我扑倒在地，一颗心依然举着你.晨曦中你拔地而起，我就在你的形象里。
5楼2014-05-18 10:53:33
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ccdbaobao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、热灭活和紫外灭活都只是将菌体的一部分活性杀灭，而并非彻底杀死菌体，所以融合后二者互补可以再生。
2、统计致死率可以用平板计数，但个人感觉稳定性不好
3、你说的几种细胞融合在一起的情况应该都有，所以需要拟定合适的筛选条件对所需的融合子进行筛选，比如单亲或双亲灭活、营养缺陷型菌株、抗性基因标记等。
我也在做原生质体，也遇到很多问题，希望能多交流交流。
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6楼2014-10-21 09:42:39
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ken1388

铜虫 (小有名气)
请问下FDA染色是怎么做的？/原来是什么？？
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小木不错！！
7楼2014-10-30 19:34:03
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