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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 制感受态的氯化钙溶液
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

[求助] 制感受态的氯化钙溶液 已有3人参与

制感受态的氯化钙溶液时间长了会有影响吗？最近做化转一直没转出来，怀疑是感受态的问题，用的氯化钙溶液是去年五月十三号师姐制的，不知道是不是氯化钙的问题。
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Someone
1楼 2014-02-24 09:22:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-02-24 18:30:27
我们实验室的CaCl2是过滤除菌的，你要不要试试这种方法？甘油可以高压灭菌后再加到配制的CaCl2溶液中。此外，制作感受态不成功的原因有很多，比如原始菌种的活性本来就不好
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
5楼2014-02-24 16:29:45
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普通回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-24 10:43:18
氯化钙要放在4度保存。感受态不好应该不是它的原因。制备感受态需要一直冰上操作。你如果不放心，就重新制备，不会花很长时间，但记得制备的氯化钙和甘油都要灭菌以后放4度保存。
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2楼2014-02-24 10:00:20
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123q明

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-24 10:00:20
氯化钙要放在4度保存。感受态不好应该不是它的原因。制备感受态需要一直冰上操作。你如果不放心，就重新制备，不会花很长时间，但记得制备的氯化钙和甘油都要灭菌以后放4度保存。

我想请教一下，关于感受态的问题，我一直都是按着步骤一步一步做的，但是感受态一直不行，上面不长菌，不知道什么原因，而且我用氯化钙洗的时候，都洗四遍，菌摇到光密度值为4.7，，前几天做的又失败了，请给予指点。。。
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3楼2014-02-24 13:25:39
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 123q明 at 2014-02-24 13:25:39
我想请教一下，关于感受态的问题，我一直都是按着步骤一步一步做的，但是感受态一直不行，上面不长菌，不知道什么原因，而且我用氯化钙洗的时候，都洗四遍，菌摇到光密度值为4.7，，前几天做的又失败了，请给予指点 ...

菌先要菌种活化，然后稍微扩大培养。再然后大量摇菌，这时要注意，摇菌到OD值为0.6-0.8，再进行离心收集菌体。
注意：培养基不能加抗生素的。
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4楼2014-02-24 15:35:57
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123q明

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-24 15:35:57
菌先要菌种活化，然后稍微扩大培养。再然后大量摇菌，这时要注意，摇菌到OD值为0.6-0.8，再进行离心收集菌体。
注意：培养基不能加抗生素的。...

恩！我们做的OD值一般为0.4-0.6之间，侧重偏0.4左右，氯化钙我们也不灭菌的，难道是这的原因？明天又要开始做感受态了
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6楼2014-02-25 16:27:00
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 123q明 at 2014-02-25 16:27:00
恩！我们做的OD值一般为0.4-0.6之间，侧重偏0.4左右，氯化钙我们也不灭菌的，难道是这的原因？明天又要开始做感受态了...

我们的的灭了。
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7楼2014-02-25 18:22:58
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damaomao

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 17:07:43
本帖内容被屏蔽
8楼2014-02-26 23:10:33
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Hliotrope

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by damaomao at 2014-02-26 23:10:33
建议重配氯化钙并灭菌，但感觉没多大影响，应该仔细核对细胞是否适用于该方法制备感受态，其次注意质粒是否适用于该细胞并且抗性基因正确并完好（建议同时做另一种确定能转化并带有相同抗性的质粒做对照），再次实验 ...

thank you
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Someone
9楼2014-02-27 09:53:55
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zhoucd07net

铜虫 (小有名气)
你是不是甘油浓度不对？
以前也是这样，不长菌，后来发现是甘油浓度低所致，重配之后就OK了……
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10楼2014-02-27 15:50:47
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