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黎明715

新虫 (初入文坛)

[求助] 制作感受态细胞没有冰浴有影响吗?

用DH5α氯化钙法制备感受态细胞,没有在冰浴进行有影响吗?还有氯化钙氯化镁要处理多久啊?氯化钙氯化镁处理有什么作用啊?
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回帖置顶 ( 共有1个 )

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
黎明715: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-21 21:47:38
mengfei8336: MolEPI+1, 谢谢您对小木虫的关注~ 2012-05-21 23:56:58
正如上面所说的,没有冰浴的还是扔掉重做吧。
至于冰浴作用是:为了让细胞膜流动性降低,利于DNA的结合,同时使细胞暂停生长,维持在对数生长期的高活性。
氯化钙冰浴处理半小时即可。作用:在CaCl2溶液中,细胞会发生膨胀,Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞。
4楼2012-05-21 16:14:18
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普通回帖

zhsDONG

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有冰浴可以直接丢掉,重新做了。离子处理是使细胞处于感受态时期。
2楼2012-05-21 12:43:48
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黎明715

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhsDONG at 2012-05-21 12:43:48:
没有冰浴可以直接丢掉,重新做了。离子处理是使细胞处于感受态时期。

为什么要冰浴啊?
3楼2012-05-21 13:13:06
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 辛苦哈 2012-05-22 08:28:38
给你篇参考的PPT哈,希望能帮到你。

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  • 附件 1 : 感受态细胞及其制备.pptx
  • 2012-05-21 16:17:36, 400.68 K
  • 附件 2 : Inoue法制备大肠杆菌超级感受态细胞.doc
  • 2012-05-21 16:18:31, 38.5 K
5楼2012-05-21 16:18:35
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黎明715

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2012-05-21 16:18:35:
给你篇参考的PPT哈,希望能帮到你。

非常感谢!!!
6楼2012-05-21 21:48:21
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zhsDONG

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 黎明715 at 2012-05-21 13:13:06:
为什么要冰浴啊?

低温下,菌体能够长时间的处于感受态时期,低温处理也可以使菌体较好的处于以感受的状态。
7楼2012-05-22 21:19:59
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xuquliang

金虫 (正式写手)

很多兄弟做实验不搞清楚原理,只是照搬操作步骤,如果以后准备从事科研的话,基础的东西还是要打好基础。
8楼2012-05-23 07:10:18
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谢谢分享!
9楼2014-08-21 02:55:40
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