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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 制作感受态细胞没有冰浴有影响吗？
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黎明715

新虫 (初入文坛)

[求助] 制作感受态细胞没有冰浴有影响吗？

用DH5α氯化钙法制备感受态细胞，没有在冰浴进行有影响吗？还有氯化钙氯化镁要处理多久啊？氯化钙氯化镁处理有什么作用啊？
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1楼 2012-05-21 12:27:51
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zhsDONG

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有冰浴可以直接丢掉，重新做了。离子处理是使细胞处于感受态时期。
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2楼2012-05-21 12:43:48
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黎明715

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhsDONG at 2012-05-21 12:43:48:
没有冰浴可以直接丢掉，重新做了。离子处理是使细胞处于感受态时期。

为什么要冰浴啊？
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3楼2012-05-21 13:13:06
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
黎明715: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-21 21:47:38
mengfei8336: MolEPI+1, 谢谢您对小木虫的关注~ 2012-05-21 23:56:58
正如上面所说的，没有冰浴的还是扔掉重做吧。
至于冰浴作用是：为了让细胞膜流动性降低，利于DNA的结合，同时使细胞暂停生长，维持在对数生长期的高活性。
氯化钙冰浴处理半小时即可。作用：在CaCl2溶液中，细胞会发生膨胀，Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞。
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4楼2012-05-21 16:14:18
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 辛苦哈 2012-05-22 08:28:38
给你篇参考的PPT哈，希望能帮到你。
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  • 附件 1 : 感受态细胞及其制备.pptx
    • 2012-05-21 16:17:36, 400.68 K
  • 附件 2 : Inoue法制备大肠杆菌超级感受态细胞.doc
    • 2012-05-21 16:18:31, 38.5 K
5楼2012-05-21 16:18:35
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黎明715

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2012-05-21 16:18:35:
给你篇参考的PPT哈，希望能帮到你。

非常感谢！！！
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6楼2012-05-21 21:48:21
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zhsDONG

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黎明715 at 2012-05-21 13:13:06:
为什么要冰浴啊？

低温下，菌体能够长时间的处于感受态时期，低温处理也可以使菌体较好的处于以感受的状态。
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7楼2012-05-22 21:19:59
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xuquliang

金虫 (正式写手)
很多兄弟做实验不搞清楚原理，只是照搬操作步骤，如果以后准备从事科研的话，基础的东西还是要打好基础。
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8楼2012-05-23 07:10:18
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malstose
谢谢分享！
9楼2014-08-21 02:55:40
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